[发明专利]过表达RimL的大肠杆菌及其在制备N-乙酰化胸腺素α中的应用

权利要求书

1.一种重组菌，为如下1)或2)：

1)将RimL的编码基因和胸腺素α的编码基因导入宿主菌中得到的重组菌；所述宿主菌为基因组中含有RimL编码基因的宿主菌；

2)将胸腺素α的编码基因导入如下权利要求6-8中任一所述的重组菌中得到的重组菌；

所述RimL为如下(a)、(b)或(c)所示的蛋白：

(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白；

(c)与a)或b)限定的DNA序列至少具有90％同源性且具有相同功能的蛋白；

所述胸腺素α为一种多肽或蛋白，其N末端的28个氨基酸残基与序列表中序列3的N末端的28个氨基酸相同或其N末端的28个氨基酸残基与序列表中序列3的N末端的28个氨基酸至少具有90％同源性。

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于：

1)所示的重组菌中，所述将RimL的编码基因和所述胸腺素α的编码基因导入宿主菌的方法包括如下步骤：

a)将所述RimL的编码基因通过重组载体2导入所述宿主菌，得到重组菌A；

b)将所述胸腺素α的编码基因通过重组载体1导入步骤a)得到的所述重组菌A，得到重组菌；

所述重组载体1为所述胸腺素α编码基因插入表达载体1中，得到表达胸腺素α的重组载体1；所述表达载体1优选为pBV220；

所述重组载体2为将所述RimL的编码基因插入表达载体2中，得到表达RimL的重组载体2，所述表达载体2优选为pOKBV。

3.根据权利要求1或2所述的重组菌，其特征在于：

1)所示的重组菌中，所述宿主菌为大肠杆菌；

所述RimL编码基因是如下1)或2)所示的DNA分子：

1)序列表中序列1所示的DNA分子；

2)与1)限定的DNA序列至少具有90％同源性且编码具有相同功能的蛋白的DNA分子；

所述胸腺素α编码基因为一种多核苷酸，其核苷酸序列与序列表中的序列4的5’末端起84位核苷酸相同或者与序列表中的序列4的5’末端起84位核苷酸同源性至少具有90％的DNA分子。

4.一种重组菌A，为将所述RimL的编码基因通过重组载体导入宿主菌中，得到的重组菌A；

所述重组载体为将所述RimL的编码基因插入表达载体中，得到表达RimL的重组载体，所述表达载体是通过诱导型启动子控制RimL的编码基因表达的。

5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于：所述诱导型启动子为乳糖启动子、阿拉伯糖启动子、碱性磷酸酯酶启动子、色氨酸启动子、噬菌体T7、P_L、P_R启动子或含有这些启动子部分元件的杂合启动子Tac、P_LP_R，所述表达载体优选为pOKBV。

6.一种重组菌，为将外源诱导型启动子插入宿主菌的乙酰基转移酶编码基因的上游，用于启动所述乙酰基转移酶编码基因的表达，得到的重组菌。

7.根据权利要求6所述的重组菌，其特征在于：所述诱导型启动子为乳糖启动子、阿拉伯糖启动子、碱性磷酸酯酶启动子、色氨酸启动子、噬菌体T7、P_L、P_R启动子或含有这些启动子部分元件的杂合启动子Tac、P_LP_R。

8.根据权利要求6或7所述的重组菌，其特征在于：

所述宿主菌为大肠杆菌；

所述诱导型启动子为噬菌体T7启动子，其核苷酸序列为序列表中序列5的自5’末端第1119-1135位核苷酸；

所述乙酰基转移酶为RimL，

所述RimL为如下(a)、(b)或(c)所示的蛋白：

(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白；

(c)与a)或b)限定的氨基酸至少具有90％同源性且具有相同功能的蛋白。

9.权利要求1-8中任一所述的重组菌在制备N-乙酰化胸腺素α中的应用。

10.一种制备N-乙酰化胸腺素的方法，包括如下步骤：

发酵权利要求1-3中任一所述的重组菌，收集发酵产物，即得到N-乙酰化胸腺素α；

所述发酵的温度为42℃，所述发酵时间为12h。