[发明专利]肺炎支原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体检测试剂盒及其制备方法，具体涉及一种肺炎支原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法。 

背景技术

肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae，MP)是引起原发性非典型肺炎及其他呼吸道感染性疾病的常见病原微生物。除呼吸道外，MP尚可引起其他系统严重的并发症。 

肺炎支原体抗体检查方法包括: 冷凝聚试验、间接血凝抑制试验、补体结合试验、肺炎支原体的培养、聚合酶链反应( PCR)。支原体肺炎的诊断有病原体培养、多种特异性血清学检查,近年又有基因探针及DNA、PCR 方法。而冷凝聚试验、间接血凝抑制试验、补体结合试验及肺炎支原体的培养由于特异性差、敏感性低等问题在临床应用价值受限。冷凝聚试验、支原体抗体测定时两者的高峰出现晚,多在2～4周,并与患者年龄、免疫功能、感染轻重、病程的长短有密切关系。肺炎支原体感染后血清冷凝聚抗体阳性者,仅仅占45%～75%。婴幼儿由于免疫系统发育未完善, 部分免疫功能低下, 在肺炎支原体感染时抗体产生不足,从而影响检出率,咽拭培养分离肺炎支原体,对于一些血清学不能诊断肺炎支原体的患儿,可提高检出阳性率。ELISA方法测定特异性MP2IgA,其阳性率达56.01%;用颗粒凝聚法测定的MP2IgM, 其阳性率达60.81%。目前国内外一致认为MP2IgM、MP2IgG等特异性抗体测定是临床诊断肺炎支原体感染较为可靠的指标之一。 

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种可以快速定性检测血清样本中肺炎支原体IgM抗体的肺炎支原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒。 

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：肺炎支原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒，包括硝酸纤维素膜检测线包被的重组抗原MP-Ag、质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体和金标垫上包被的由胶体金标记的鼠抗人IgM单抗， 

所述重组肺炎支原体抗原为无色透明液体，浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定；

所述羊抗鼠IgG抗体为无色透明液体，浓度大于4mg/ml；

所述鼠抗人IgM单抗为无色透明液体，浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定，上样量在10μl条件下为两条带。

本发明的另一个目的是提供肺炎支原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤： 

（1）反应膜的制备：用磷酸盐缓冲液将重组MP-Ag稀释到包被浓度为1.0mg/ml，将羊抗鼠IgG抗体稀释成包被浓度为2.0mg/ml，用点膜机将两种包被液分别划到硝酸纤维素膜上，将已包被的硝酸纤维素膜干燥后保存；

（2）鼠抗人IgM单抗金结合物垫的制备：将标记浓度为10-18μg/ml的鼠抗人IgM单抗与胶体金进行偶联制得胶体金标记鼠抗人IgM单抗溶液，以转速为12000r/min离心40min，弃上清，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，然后用混合液浸泡金标垫，制备成MP-IgM金结合物垫，将MP-IgM金结合物垫干燥后保存；

（3）切割装配：在反应膜所在胶板的上部揭去1.5cm宽的不干胶纸，粘贴上粗纤维滤纸，使纸的下部压住反应膜，揭去反应膜下部的0.9cm的不干胶纸，贴上MP-IgM金结合物垫，并且MP-IgM金结合物垫的上部压住反应膜1mm，再揭去MP-IgM金结合物垫下部的的不干胶纸，贴上样品垫，样品垫的上部压住MP-IgM金结合物垫的下部1mm，制成反应板，再用切条机切成4mm试纸条，进行装卡后，装入铝箔袋内制成产品。

上述制备方法中，所述步骤（1）和（2）的干燥条件为37℃干燥3小时。 

上述制备方法中，所述步骤（2）的鼠抗人IgM单抗的标记浓度为15μg/ml。 

本发明的有益效果为：肺炎支原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点，整个操作时间仅需20分钟就可以判读结果。胶体金快速检测试纸条，以多表位的重组抗原为原料，具有操作更加简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高的特点，可单份检测，易于普及，对于肺炎支原体IgM抗体的检测和控制效果明显。 

具体实施方式

一、生产工艺条件的确定 

1、反应膜包被条件的优化：

1.1检测线包被浓度和胶体金标记鼠抗人IgM稀释比例的选择：