[发明专利]水体环境中铜绿微囊藻噬藻体的SYBR-Green荧光定量RT-PCR检测方法

权利要求书

1.水体环境中铜绿微囊藻噬藻体的SYBR-Green荧光定量RT-PCR检测方法，包括下列步骤：

    (1) 基于铜绿微囊藻噬藻体Ma-LMM01的g91基因片段，利用引物设计软件设计定量外参标准品引物SH-WF/ SH-WR和定量PCR引物SH-RTF/SH-RTR：

SH-WF：5’-CTACCAGTGGCCGATATTTCCTT-3’

SH-WR：5’-GGTAAAGCCTCTATTAGCAGTGTTG-3’

SH-RTF：5’-ACATCAGCGTTCGTTTCGG-3’

SH-RTR：5’-GTGACAATCTGGTTAGGTAGGTCG-3’；

(2) 提取待检水样浓缩液中噬藻体DNA基因片段；

(3) 用定量外参标准品引物SH-WF:5’-CTACCAGTGGCCGATATTTCCTT-3’和SH-WR5’-GGTAAAGCCTCTATTAGCAGTGTTG-3’扩增并构建铜绿微囊藻噬藻体g91基因定量检测的外参标准品，根据标准品Ct值，得到g91基因定量标准曲线；

(4) 用定量PCR引物SH-RTF：5’-ACATCAGCGTTCGTTTCGG-3’和

SH-RTR：5’-GTGACAATCTGGTTAGGTAGGTCG-3’扩增待测样品中铜绿微囊藻噬藻体g91基因序列，将所测样品的Ct值与g91基因定量标准曲线对比得到检测水样中噬藻体g91基因拷贝数量。