[发明专利]肺炎支原体快速培养、鉴别与药敏的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种肺炎支原体检测技术领域，具体涉及一种肺炎支原体快速培养、鉴别与药敏的试剂盒，以及采用该试剂盒检测肺炎支原体的检测方法。

背景技术

肺炎支原体(myeoplasmapneumoniae，Mp)是介于细菌和病毒之间、兼性厌氧、能独立生活的最小微生物，经呼吸道传播，是呼吸道感染的主要病原体，其引起的支原体肺炎占非细菌性肺炎的1/3以上。

临床检测肺炎支原体(MP)感染的方法有以下几种：

1、检测血清中的Mp抗体：本法快速简便，阳性率高，但Mp抗体是人体受Mp感染刺激的产物，感染后数周才能检出，可维持数月至数年。因此，Mp抗体阳性结果与Mp感染不同步；

2、简单鉴别培养：本法培养基中含葡萄糖，仅靠分解葡萄糖产酸使指示剂变色原理对Mp进行鉴别，因许多微生物(包括非致病支原体)也能葡萄糖产酸，故检测假阳性常见；

3、选择鉴别培养：本法培养基中加有美兰和葡萄糖，因只有Mp等极少数微生物能在含美兰的培养液中生长而分解葡萄糖产酸，故结果较准确，故国外实验室多推荐采用；

4、Mp基因检测(PCR法)：本法直接检测Mp的基因，为临床提供Mp感染的直接依据，但对人员、环境、设备、试剂要求高，稍不慎则易出现假阳性及假阴性；

简单培养+药敏试验法：如专利CN101748187A、CN101555517A，由培养液和药敏微孔板组成。培养液属简单鉴别培养液，抑菌成分单一；药敏微孔板参照检测泌尿系统感染支原体(解脲支原体、人型支原体)使用的方法制备，不含选择鉴别(如美兰还原耐受)功能，难于无法避免细菌、真菌、其它支原体引起的假阳性。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种检测周期短、且能够避免假阳性的肺炎支原体快速培养、鉴别与药敏的试剂盒以及检测方法。

为实现上述发明目的，本发明所采用技术方案如下：

一种肺炎支原体快速培养、鉴别与药敏的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括：

培养管，在所述培养管内盛装有：为Mp生长提供基本营养的基础液、提高Mp生长速度的促生长剂、指示MP生长进度的生长指示剂、以及抑制其他杂菌生长的杂菌抑制剂；

药敏鉴别板，该药敏鉴别板包括鉴别区和药敏试验区；所述鉴别区包括四个鉴别微孔，所述四个鉴别微孔分别盛装有干燥的精氨酸(Arg)、氯化三苯基四氮唑蓝(TTC)、美兰(MB)、以及β-内酰胺类药物(β-Lac)；所述药敏试验区包括14组药敏检测单元，每组药敏检测单元包括两个药敏微孔，在各组药敏检测单元内分别盛装有红霉素、乙酰螺旋霉素、交沙霉素、四环素、强力霉素、米诺环素、罗红霉素、左氧氟沙星、氧氟沙星、阿奇霉素、克拉霉素、斯帕沙星、环丙沙星、以及壮观霉素，其同一组药敏检测单元的两个药敏微孔中盛装的药物浓度不相同；以及

盛装有无菌矿物油的容器单元。

所述肺炎支原体快速培养、鉴别与药敏的试剂盒中，所述基础液为支原体培养基基础、Hayflick培养基、改良马丁培养基中的任一种。

所述肺炎支原体快速培养、鉴别与药敏的试剂盒中，所述促生长剂包括主成分和添加成分；所述主成分为浓度5％～20％的马血清或小牛血清；所述添加成分为酵母浸出粉、丙酮酸钠、半胱氨酸、异抗坏血酸、卵黄液中的一种或几种。

所述肺炎支原体快速培养、鉴别与药敏的试剂盒中，所述生长指示剂包括葡萄糖、酚红、以及脱氢酶色原底物。

所述肺炎支原体快速培养、鉴别与药敏的试剂盒中，所述杂菌抑制剂包括万古霉素、啶酸、二性霉素B、多粘菌素B、以及甲氧苄氨嘧啶(TMP)。

一种使用所述试剂盒检测肺炎支原体的检测方法，包括以下步骤：

将样本拭子放入培养管的培养液中充分洗脱挤干；

再将培养液以100微升每孔(ul/孔)的量加入至药敏鉴别板的微孔中；

将矿物油以1滴每孔的量添加至各个微孔中；

将试剂盒放置在35℃～37℃的环境下培养24～72小时，根据微孔颜色变化判定结果。

结果判断如下：

鉴别区：Arg-TTC-MB-β-Lac表现为黄-红-黄绿-黄为Mp，否则为其它支原体；

药敏区：同种药物低浓度(L)孔、高浓度(H)孔均红，判敏感；低浓度(L)孔变黄、高浓度(H)孔红，判中敏；低浓度(L)孔、高浓度(H)孔均黄，判耐药。

本发明的有益效果如下：

1、本发明通过培养液配方中杂菌抑制剂的设计，解决了细菌和真菌引起的假阳性问题；