[发明专利]果糖基化芒果苷及其制备方法与用途

权利要求书

1.一种果糖基化芒果苷，所述果糖基化芒果苷具有下述式(I)所示的结构：

其中，R₁、R₂、R₃和R₄分别选自氢、甲基、乙基、甲酰基、乙酰基、甲氨基和硫酸基中的一种；R为果糖单糖基或2个果糖连接的寡糖基，其结构如式(II)所示：

其中，n＝0-1。

2.根据权利要求1所述的果糖基化芒果苷的制备方法，其特征在于，该方法包括将具有果糖基化酶活力的物质加入含有芒果苷的转化液中，进行生物转化反应，使芒果苷转化为果糖基化芒果苷，所述转化液中含有芒果苷和糖基供体，优选地，所述糖基供体为果糖或蔗糖；转化反应结束后，去除转化液中的菌体细胞或菌体蛋白，再将其用树脂纯化，然后将经树脂纯化得到的果糖基化芒果苷馏分旋转蒸发或冷冻干燥后得到果糖基化芒果苷粉末或晶体。

3.根据权利要求2所述的果糖基化芒果苷的制备方法，其特征在于，所述具有果糖基化酶活力的物质包括具有果糖基化酶活力的发酵液、发酵液上清、纯化的果糖基化酶和果糖基化酶重组表达蛋白，优选地，果糖基化酶为β-D-呋喃果糖苷酶，更为优选地，所述β-D-呋喃果糖苷酶来源于节杆菌属细菌，其分子量约60kDa，N端前5个氨基酸序列分别为ATEPV。

4.根据权利要求2至3任一项所述的果糖基化芒果苷的制备方法，其特征在于，所述发酵液或发酵液上清由具有果糖基化芒果苷活力的微生物发酵获得，优选地，所述微生物为烟草节杆菌，其保藏号为CCTCCM2010164，优选地，所述微生物发酵用包含：蔗糖5～80g/L，蛋白胨5～50g/L，KH₂PO₄ 0.4～4g/L，CaCl₂ 0.5～5g/L，MnSO₄ 0.1～2g/L，pH 6～8的发酵培养基，于25～40℃，10～400rpm摇瓶振荡或发酵罐搅拌通气，转速通气量为1～6vvm，10～400rpm，发酵6～48小时，优选地，所述微生物发酵用包含蔗糖15g/L，蛋白胨25g/L，KH₂PO₄ 2g/L，CaCl₂ 2g/L，MnSO₄0.2g/L，pH 7.5的发酵培养基，于30℃，240rpm摇瓶振荡16小时或发酵罐搅拌通气，转速通气量为4vvm，300rpm，发酵6小时。

5.根据权利要求2至4任一项所述的果糖基化芒果苷的制备方法，其特征在于，所述生物转化反应在非水相反应条件中进行；所述非水相反应条件为：采用10～400rpm摇瓶振荡或发酵罐搅拌，5～50％的亲水性有机溶剂，芒果苷浓度为0.1～70g/L，芒果苷和糖基供体的配比为摩尔比1∶1～1∶200，加入10％～50％的发酵液或发酵液上清，所述发酵液或发酵液上清含果糖基化酶10～100U/mL，在pH4～8的缓冲溶液中，于25～40℃，反应6～400小时。

6.根据权利要求5所述的果糖基化芒果苷的制备方法，其特征在于，所述亲水性有机溶剂选自二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、丙酮或乙醇的一种或几种；优选地，所述非水相反应条件为：采用20％的二甲基亚砜，62.7g/L芒果苷，200g/L蔗糖为糖基供体，加入20％的发酵液上清，所述发酵液上清含果糖基化酶30U/mL，于1/15mol/L pH6.86的磷酸盐缓冲液的发酵罐中，于30℃，300rpm搅拌转化360小时。

7.根据权利要求2至6任一项所述的果糖基化芒果苷的制备方法，其特征在于，所述树脂纯化为将含有果糖基化芒果苷的转化液通过AB-8大孔树脂吸附；吸附后先采用洗脱液洗去残余的糖基供体，然后采用洗脱液梯度洗脱或阶段洗脱分别得到果糖基化芒果苷；

优选地，先用10倍柱床体积pH 4～4.5的蒸馏水洗去残余的糖基供体，然后采用5～30％的甲醇或乙醇溶液梯度洗脱或阶段洗脱分别得到果糖基化芒果苷。

8.根据权利要求2至7任一项所述的果糖基化芒果苷的制备方法，其特征在于，当在非水相反应条件中转化反应时，该吸附在将转化液中的有机溶剂低温蒸发去除或将有机溶剂稀释至低于2％体积比的条件下进行。

9.根据权利要求1所述的果糖基化芒果苷的用途，所述果糖基化芒果苷在制备用于治疗肿瘤相关疾病的药物中的应用。