[发明专利]含有免疫球蛋白Fc片段和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的复合物及其药物组合物

权利要求书

1.一种复合物，包括免疫球蛋白Fc片段和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子。

2.如权利要求1所述的复合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段通过化学分子与所述粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子相连。

3.如权利要求2所述的复合物，其中所述化学分子为聚乙二醇多聚物，所述聚乙二醇多聚物的分子量在500至60000道尔顿之间。

4.如权利要求3所述的复合物，其中所述粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和所述聚乙二醇多聚物形成的一个或多个聚乙二醇化产物与单个分子的免疫球蛋白Fc片段以共价键连接。

5.如权利要求4所述的复合物，其中所述聚乙二醇多聚物通过其自身两端的反应性基团与所述粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和所述免疫球蛋白Fc片段共价连接。

6.如权利要求5所述的复合物，其中所述聚乙二醇多聚物分子两端的反应性基团包括选自以下的一种或两种：醛基、琥珀酰亚胺琥珀酸酯、琥珀酰亚胺碳酸酯、琥珀酰亚胺丙酸酯和羟基琥珀酸亚胺，其中所述醛基优选是丙醛基或丁醛基。

7.如权利要求1至6任一项所述的复合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段是非糖基化的。

8.如权利要求1至7任一项所述的复合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段包括选自C_H1，C_H2，C_H3，C_H4结构域中的1个到4个结构域，优选地，所述免疫球蛋白Fc片段还包括铰链区。

9.如权利要求1至8任一项所述的复合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段选自IgG、IgA、IgD、IgE、IgM的Fc片段以及它们的组合和杂合体组成的组，优选地，选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的Fc片段以及它们的组合和杂合体组成的组，更优选地，所述免疫球蛋白Fc片段是IgG4 Fc片段，最优选地，所述免疫球蛋白Fc片段是人IgG4Fc片段。

10.如前述任一项权利要求所述的复合物，其中所述粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子分离于天然产物，或者是人工合成的，优选地其具有SEQ ID No：1或者是SEQ ID No：2的氨基酸序列，或者是源自SEQ ID No：3或4的核苷酸序列。

11.一种制备复合物的方法，所述复合物包括免疫球蛋白Fc片段和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，所述方法包括如下步骤：

(a)将所述免疫球蛋白Fc片段或所述粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与活化的聚乙二醇多聚物的一端共价连接，形成聚乙二醇化产物；

(b)从步骤(a)所得反应混合物中分离含有与所述聚乙二醇多聚物共价连接的免疫球蛋白Fc片段或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的聚乙二醇化产物；

(c)将免疫球蛋白Fc片段或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与分离的所述聚乙二醇化产物中的聚乙二醇多聚物的另一端共价连接，以得到含有由聚乙二醇多聚物连接的免疫球蛋白Fc片段和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的复合物；以及

(d)分离步骤(c)中的所述复合物。

12.如权利要求11所述的方法，其中在步骤(a)中，所述粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和所述聚乙二醇多聚物的反应摩尔比例为1∶0.5至1∶20，优选为1∶5；或所述聚乙二醇多聚物和所述免疫球蛋白Fc片段的反应摩尔比例为1∶1至1∶8，优选为1∶4。

13.如权利要求11或12所述的方法，其中在步骤(c)中，获自步骤(b)的聚乙二醇化产物与免疫球蛋白Fc片段或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的反应摩尔比例为1∶1至1∶8，优选为1∶4。

14.如权利要求11-13任一项所述的方法，其中所述聚乙二醇多聚物两端的反应性基团选自以下的一种或两种：醛基、琥珀酰亚胺琥珀酸酯、琥珀酰亚胺碳酸酯、琥珀酰亚胺丙酸酯和羟基琥珀酰亚胺，其中所述醛基优选是丙醛基或丁醛基。

15.如权利要求11-14任一项所述的方法，其中步骤(a)和步骤(c)是在还原剂存在下进行的，优选地，所述还原剂选自氰基硼氢化钠、硼氢化钠、硼酸二甲胺和硼酸吡啶。

16.一种药物组合物，包括权利要求1-10任一项所述的复合物或通过权利要求9-13任一项所述的方法制备的复合物、和药学上可接受的载体。

17.权利要求1-10任一项所述的复合物、或通过权利要求9-13任一项所述方法制备的复合物、或权利要求16所述的药物组合物在制备治疗白细胞和中性粒细胞减少病症的药物中的用途。