[发明专利]适用于作物SSR分子标记分析的基因组DNA提取方法

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体地说，涉及一种适用于作物SSR分子标记分析的基因组DNA提取方法。

背景技术

传统的常规育种方法工作量大、育种周期长、效率低，消耗大量人力物力，难以满足对选育优良品种的要求。目前，利用分子标记技术进行辅助育种已成为一种趋势。许多分子标记表现为共显性，可以鉴别出纯合基因型和杂合基因型，可提供较为完整的遗传信息。分子标记技术直接以遗传物质DNA形式表现，不受物种的组织类别、发育阶段等影响，不受季节、环境等限制。分子标记辅助育种促使育种工作更便利，效率更高，结果更准确可靠。

植物基因组DNA提取是分子标记技术操作的关键步骤之一。目前，常用的植物基因组DNA提取方法主要有CTAB法、SDS法和高盐法及其改良方法；这些方法一般步骤为：使用液氮或机械研磨材料，加入DNA提取缓冲液于65℃裂解细胞、释放DNA，后经酚、氯仿和异戊醇等抽提多糖类、蛋白质等杂质来纯化DNA，之后使用无水乙醇或异丙醇沉淀DNA，最后晾干DNA和溶解DNA。操作过程较为繁琐，耗时多，生产效率低，成本高。

因此，寻找一种简便、快速、能够满足SSR分子标记技术要求的作物基因组DNA提取方法成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种简便、快速、高通量、成本低的适用于作物SSR分子标记分析的基因组DNA提取方法。

为了实现本发明目的，本发明的一种适用于作物SSR分子标记分析的基因组DNA提取方法，包括步骤：

1)向叶片中加入DNA提取缓冲液，蛋白酶K和核糖核酸酶，振荡混匀；

2)将上述混合体系置于37℃，30min；68℃，20min；37℃，30min；然后于4℃保存；

3)将步骤2)中得到的混合体系快速转置于冰上冰浴5-10min；

4)将步骤3)中得到的混合体系离心，得上清。

前述的基因组DNA提取方法，步骤1)具体为：向0.02～0.04cm²的叶片中加入50～100μLDNA提取缓冲液，0.2～0.4μL的100mg/mL蛋白酶K和1～2μL的10mg/mL核糖核酸酶，振荡混匀10～20sec；

其中，DNA提取缓冲液的成份为10mmol/L Tris-HCl，1mmol/LEDTA，0.1％SDS，pH值8.0。

优选地，步骤1)为：向0.02～0.04cm²的叶片中加入50μL DNA提取缓冲液，0.2μL的100mg/mL蛋白酶K和1μL的10mg/mL核糖核酸酶，振荡混匀10sec。

前述的基因组DNA提取方法，步骤2)为混合体系置于PCR扩增仪中进行反应。

前述的基因组DNA提取方法，步骤4)为4℃下3000～5000rpm离心10～15min，优选地，4℃下3000rpm离心10min。

前述的基因组DNA提取方法，所述作物为甘蔗、水稻、玉米、大豆或花生等。

本发明至少具有下列优点及有益效果：

(一)本发明所述的基因组DNA提取方法不需要研磨样品，无需抽提蛋白质、沉淀DNA、洗涤DNA和溶解DNA，所用的试剂少，提取成本低。

(二)本发明所述的DNA提取方法可使用96孔PCR板装载反应物，具备高通量特性，可在短时间内完成大批量样品DNA的提取。

(三)本发明所述的DNA提取方法仅有4个操作步骤，简单易行。

(四)本发明所述的DNA提取方法为“单管制备DNA模板”，提取过程中不需要转换存放基因组DNA的器皿，避免交叉污染，做到DNA模板质量无污染。

(五)本发明所述的DNA提取方法适用范围较广，提取甘蔗、水稻、玉米、大豆和花生等作物的基因组DNA的质量较好，可以满足SSR分子标记分析。

附图说明

图1为采用本发明方法提取甘蔗、水稻、玉米、大豆和花生基因组DNA的0.8％琼脂糖凝胶电泳检测结果，1～2为甘蔗品种湛江25号、ROC20，3～4为水稻品种博优168、金优桂99，5～6为玉米品种正大619、桂糯518，7～8为大豆品种桂春豆1号、桂早2号，9～10为花生品种桂花26、桂花30。