[发明专利]石榴中没食子酸、鞣花酸和安石榴甙A&B的分析方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于天然产物分析检验及应用领域，特别涉及石榴中没食子酸、鞣花酸和安石榴甙A&B分析方法的建立，以及该方法在石榴产品分析检测中的应用。

背景技术

石榴属于石榴科（Punicaceae）石榴属（Punica），是一种营养价值很高的水果。石榴常用于鲜食，或加工成石榴汁饮料、石榴酒、石榴酱等，产品种类繁多。石榴不仅含有普通植物所共有的碳水化合物、脂质、蛋白质等成分外，还富含多种活性成分，如多酚、黄酮、花青素、生物碱等。多酚化合物因具有抗氧化、清除自由基、抗癌、抗衰老、保护心血管系统、保护消化系统、降血糖等生理活性功能，备受人们关注。随着人们健康意识的提高，天然产物中活性成分的分离提取、分析检测和功能性评价研究成为关注的热点。

石榴资源丰富，是很好的抗氧化活性多酚的生产原料。不同部位来源的多酚组成和含量不尽相同。石榴汁中多酚含量约为0.21%，主要包括没食子酸、鞣花酸和儿茶素。石榴皮中多酚含量约为10.4%~21.3%，主要包括安石榴甙、鞣花酸和没食子酸。石榴籽油中多酚含量很低，仅为0.015%。这些多酚化合物严重地影响着石榴的营养价值，同时石榴所具有的一些重要的保健医疗功效也主要归功于没食子酸、鞣花酸、安石榴甙等多酚化合物，如石榴果汁在体内的减少氧化应激、抗动脉粥样硬化和减少血小板凝聚功效，石榴皮提取物在体外的抗氧化、抑制微生物生长和抑菌功效。没食子酸是一种很强的抗氧化剂，具有抗真菌、抑制细菌、保护细胞免受氧化破坏等功效，被广泛应用于制药领域。安石榴甙是一种很有潜力的抗氧化剂，研究发现安石榴甙有两个可逆的A和B（α-和β-）异头物，可以预防对油脂、氨基酸和鸟嘌呤核苷的氧化破坏作用，但是β-异构体比α-异构体具有更强的抗氧化能力。鞣花酸是一个膳食多酚，具有很强的抗氧化、抗癌和抗动脉粥样硬化等功效。

目前，对于石榴中没食子酸、鞣花酸和安石榴甙A&B的研究，主要集中在分离提取和功能性评价方面，关于分析检测的研究在国内外比较少。文献检索发现目前几乎没有关于石榴产品中没食子酸、鞣花酸、安石榴甙A和安石榴甙B分析方法的研究。考虑到这些多酚化合物的重要保健医疗功效，非常有必要建立一种石榴中没食子酸、鞣花酸和安石榴甙A&B的新型快速检测方法，并探讨其在石榴产品分析检测中的应用前景。本发明中所测定的没食子酸、鞣花酸和安石榴甙A&B的结构式如图3－5所示。

发明内容

本发明为了克服上述现有技术中的不足，第一方面提供一种石榴中没食子酸、鞣花酸和安石榴甙A&B的新型快速检测方法，第二方面提供了该方法在石榴产品分析检测中的应用。

本发明的第一方面提供的技术方案为石榴中没食子酸、鞣花酸和安石榴甙A&B的分析方法，其特征在于：采用高效液相色谱技术，通过优化HPLC分析条件一次性分离检出4种多酚化合物——没食子酸、鞣花酸、安石榴甙A和安石榴甙B，建立一种石榴中没食子酸、鞣花酸和安石榴甙A&B的高效液相色谱分析方法。

石榴中没食子酸、鞣花酸和安石榴甙A&B的分析方法，具体按照下述步骤进行：（1）准确称取没食子酸、鞣花酸和安石榴甙A&B标准品适量，依次用HPLC级水、NaOH溶液和甲醇溶解，混匀，配制成标准储备溶液，避光-18 ℃保存；临用时，用HPLC级水、NaOH溶液和甲醇稀释上述标准储备溶液，配置成不同浓度的没食子酸、鞣花酸和安石榴甙A&B标准工作液，避光-18 ℃保存；

（2）用HPLC级水、磷酸和乙腈来配制流动相A和B；

（3）开启高效液相色谱系统，设定高效液相色谱分析条件；

（4）由稀至浓依次将不同浓度的没食子酸、鞣花酸和安石榴甙A&B标准工作液用上述高效液相色谱分析条件来检测，记录HPLC色谱图和峰面积，确定没食子酸、鞣花酸、安石榴甙A和安石榴甙B的检测波长、保留时间、检出限、定量限、线性关系和相关系数、方法回收率和稳定性，建立4种多酚化合物的线性方程；

（5）将经过预处理的石榴样品溶液，用0.2 μm微孔滤膜过滤即得供试石榴样品溶液；

用上述高效液相色谱分析条件来检测，记录HPLC色谱图和峰面积，根据4种多酚化合物的线性方程，计算即获得不同石榴样品中没食子酸、鞣花酸、安石榴甙A和安石榴甙B的含量。