[发明专利]乙型脑炎病毒NS1蛋白特异性B细胞抗原表位多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及抗原表位多肽，尤其涉及乙型脑炎病毒JEV NS1蛋白特异性B细胞抗原表位多肽，本发明还涉及该抗原表位多肽在诊断乙型脑炎病毒中的应用，属于分子免疫学领域。

背景技术

流行性乙型脑炎是由乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis virus，JEV)引起的一种重要蚊媒性人兽共患传染病。该病毒首先于1953年在日本从患者脑组织中分离获得，因此称日本脑炎病毒，所致疾病在日本称日本乙型脑炎。在我国最早于1940年分离此病毒，为了与甲型脑炎相区别，定名为流行性乙型脑炎，简称乙脑。在世界范围内每年有30,000-50,000例乙脑病例，约25％-30％死亡，50％导致永久性中枢神经系统后遗症。我国近年每年的乙脑病例大于5000例，死亡200例以上。对于流行性乙型脑炎病毒多种动物易感，但除人、马和猪外通常不呈现临床症状。对人主要引起中枢神经系统的急性感染，人感染临床上以高热、意识障碍、抽搐、呼吸衰竭及脑膜刺激征为特征。母猪感染可引起流产、产死胎或木乃伊胎，公猪感染导致睾丸肿大影响繁殖性能为特征，少数猪只感染可能呈现发热和神经症状，而其他猪则大多数不呈显症状。给养猪业造成巨大的经济损失。马属动物易感染，少数引起脑炎与神经症状，马是终末宿主。蚊是JEV的主要传播媒介，猪是该病毒在自然界中最重要的贮存与增殖宿主。乙型脑炎病毒主要在亚洲流行，而最近发现在南半球也有报道，这说明流行性乙型脑炎可能在世界范围内威胁着人类健康。

乙型脑炎病毒JEV属黄病毒科，黄病毒属，为单链正链RNA病毒。基因组约11kb，包含一个大的开放阅读框架(ORF)，两端是5’端和3’端非编码区(UTR)。基因组5’端有帽子结构，但在3’端没有poly(A)尾。ORF编码含3432个氨基酸的前体蛋白，在病毒和宿主细胞蛋白酶的作用下加工为10个成熟蛋白，包含3个结构蛋白(C，prM，E)，7个非结构蛋白(NS1，NS2A，NS2B，NS3，NS4A，NS4B，NS5)。病毒粒子呈球形，直径约30nm，有囊膜。JEV只有一个血清型，在抗原性上与西罗病毒、墨罗河谷脑炎病毒、圣路易脑炎病毒等属同一血清群，存在抗原交叉反应。病毒囊膜糖蛋白具有血凝特性，能凝集鹅、鸽、雏鸡等动物红细胞。病毒对热抵抗力弱，56℃30分钟或100℃2分钟即可灭活，但对低温和干燥的抵抗力很强。乙醚、1∶1000的去氧胆酸钠以及常用消毒剂均可灭活病毒，在酸性条件下不稳定，适宜pH8.5～9.0。

采用疫苗进行预防接种是控制该病流行的有效措施。对人或动物机体的JEV抗体检测是了解JEV感染或免疫情况的重要内容，也是指导免疫预防的重要科学依据。NS1蛋白是乙脑病毒的一种重要的非结构蛋白，不存在于病毒粒子结构中，只有在自然感染或弱毒疫苗免疫情况下机体才产生抗NS1蛋白抗体，而灭活疫苗免疫或亚单位疫苗免疫则不产生NS1蛋白抗体。所以检测NS1蛋白抗体可以诊断JEV感染，以及鉴别诊断灭活苗免疫与感染。JEV E蛋白极易与其它黄病毒如登革病毒、西尼罗病毒等产生血清学交叉反应而影响诊断结果。而JEV NS1蛋白抗体特异性强，与特性相近的其它黄病毒如登革病毒、西尼罗病毒等血清学交叉反应极低。以NS1蛋白为靶抗原检测具有很强的特异性。更进一步地，采用NS1蛋白特异性抗原表位多肽为抗原检测相应抗体则可以进一步提高检测的特异性，也可以更好地进行质量标准控制。有利于提高试剂盒的质量标准化与生产控制水平，也可以提高检测诊断结果的特异性。

发明内容：

本发明的目的之一提供乙型脑炎病毒JEV NS1蛋白特异性B细胞抗原表位多肽。

本发明的目的之二是将所述的乙型脑炎病毒JEV NS1蛋白特异性B细胞抗原表位多肽应用于制备成诊断或检测乙型脑炎病毒的试剂。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一种乙型脑炎病毒JEV NS1蛋白特异性B细胞抗原表位多肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示(₃₄₀H-HDETTLVRSQV-OH₃₅₀)。该抗原表位序列在不同JEV毒株中高度保守，只有少数毒株中该序列中第四位氨基酸T突变为A。

通过试验进一步发现，将SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中第四位氨基酸残基T替换为A后，所得到的氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示(₃₄₀H-HDEATLVRSQV-OH₃₅₀)与SEQ ID NO：1具有同样的与NS1蛋白单抗结合活性。