[发明专利]探针法检测CHO细胞DNA含量的方法

权利要求书

1.一种荧光定量PCR检测CHO细胞DNA的方法，采用GeneBank登录号为EF540878.1的核苷酸序列设计特异性引物对及Taqman探针，对待测样本提取DNA后进行实时荧光定量PCR，根据所获得的标准曲线，计算得到待检样本中CHO细胞DNA的量。

2.如权利要求1所述荧光定量PCR检测CHO细胞DNA的方法，其特征在于，所述的特异引物对包括正向引物Primer-F和反向引物Primer-R，其中

Primer-F序列为：5’-ACAGGTTTCTGCTTCTGGCT-3’，

Primer-R序列为：5’-TAGCAGACACTGTTGTAGAG-3’；

所述Taqman探针序列为：5’-CTGTTCTAAGTAGACTGCGAGCCCT-3’。

3.如权利要求1所述荧光定量PCR检测CHO细胞DNA的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR检测反应体系中含有DNA模板、Taq酶、dNTPs、Rox染料、Mg²⁺、PCR缓冲液、Taqman探针、正向引物和反向引物。

4.如权利要求1所述荧光定量PCR检测CHO细胞DNA的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR中，每次检测均设立参考品，阴性质控品和阳性质控品。

5.如权利要求1所述荧光定量PCR检测CHO细胞DNA的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的反应程序为：95℃预变性10min；95℃15s，60℃1min，40个循环。

6.如权利要求1-5任一所述荧光定量PCR检测CHO细胞DNA的方法，其特征在于，所述待检样本可为但不限于CHO细胞表达或生产的治疗蛋白质药物、重组疫苗或单克隆抗体。

7.一种荧光定量PCR检测CHO细胞DNA的试剂盒，包括：PCR扩增反应液、参考品、阴性质控品、阳性质控品以及DNA稀释液，所述PCR扩增反应液含有Taq酶、dNTPs、Rox染料、Mg²⁺、PCR缓冲液、正向引物、反向引物以及Taqman探针，其中，所述正向引物、反向引物及Taqman探针为Genebank登录号为EF540878.1序列的特异性引物及探针。

8.如权利要求7所述试剂盒，其特征在于，所述的特异引物对包括正向引物Primer-F和反向引物Primer-R，其中

Primer-F序列为：5’-ACAGGTTTCTGCTTCTGGCT-3’；

Primer-R序列为：5’-TAGCAGACACTGTTGTAGAG-3’；

所述Taqman探针序列为：5’-CTGTTCTAAGTAGACTGCGAGCCCT-3’。

9.如权利要求7所述试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增反应液中，正向引物浓度为0.2-1.0μmol/L，反向引物浓度为0.2-1.0μmol/L，Taqman探针浓度为0.2-3.0μmol/L，Taq酶用量为50000-200000U/L，dNTP含量为0.1-0.5mM/L，Mg²⁺浓度为3.0-6.0mM/L，引物总浓度为0.4-2.0μmol/L，PCR缓冲液则稀释为1X。

10.如权利要求7所述试剂盒，其特征在于，所述参考品为CHO细胞基因组DNA，所述阳性质控品为CHO细胞基因组DNA，所述阴性对照品为纯水。