[发明专利]一种高纯度栀子苷及其制剂的制备及临床应用

说明书

一、技术领域

本发明属一种高纯度栀子苷及其制剂的制备及临床应用。

二、背景技术

栀子是茜草科植物栀子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果实，它作为中药具有护肝、利胆、降压、清热、利寒、止泻等功能。

栀子苷是从茜草科植物栀子的干燥成熟果实中运用高科技生产工艺提取精制而成的产品，为环烯醚萜苷类化合物。栀子苷有多种用途，是用于治疗心脑血管、肝胆等疾病及糖尿病的原料药物。

目前，从栀子中提取栀子色素、栀子苷方法的报道很多，但存在很多问题，如产品中杂质含量偏高，无法满足国内外客户的要求；生产成本较高，收率低，经济效益较差；不适合工业化生产等。

因此，从栀子中提取纯化得到高纯度的栀子苷，并制成适宜的制剂，如口服制剂(片剂、胶囊、颗粒等)、注射剂(注射液、粉针剂、大输液等)，应用于临床，用于治疗心脑血管、肝胆等疾病及糖尿病。

三、发明内容

1、一种高纯度栀子苷的提取纯化方法

(1)、栀子的粗提

取栀子，粉碎成粗粉，以40％乙醇渗漉，收集渗漉液，浓缩至体积与药材重量1∶1，抽滤，即得。栀子苷提取率90％左右。栀子黄用紫外初步得出提取率为90％左右。

经采用温浸(温度50度，温浸二次，第一次6倍量水，时间2小时，第二次4倍量水，时间1小时)对不同浓度的乙醇(30％，40％，50％，60％)发现40％的乙醇提取时，栀子苷和栀子黄收得量最高。以40％乙醇为溶剂，采用渗漉法对药材粉末进行渗漉，结果表明渗漉法与温浸法两种方法提取，所得两种成份收率无显著性差别，但渗漉法所用溶剂相对较少，成本稍低，因此采用渗漉法进行提取。

(2)、栀子苷和栀子黄的分离

取上述溶液与干树脂比以1∶2至1.5∶2上已处理好的AB-8大孔树脂柱，控制流速0.5-0.8ml/min，使栀子黄和栀子苷充分吸附，再以5倍溶液体积的水洗脱，弃去洗脱液，以5倍30％乙醇继续洗脱，收集洗脱液(为栀子苷组份)。将收集的30％乙醇洗脱液浓缩，干燥，研细，得栀子苷粗品(栀子苷含量60％以上)。或浓缩成与上样前相同体积的溶液，备用。

采用不同型号的大孔树脂(AB-8、D101，NKA-9，D301R)对样品溶液进行洗脱，结果发现，仅AB-8型大孔树脂可同时对栀子黄和栀子苷进行吸附，且吸附容量最大，以5倍以上的水进行洗脱均不能使栀子苷和栀子黄泄漏，而5倍量的水基本使样品溶液中多糖、部分绿原酸及大量的水溶性杂质洗掉，吸附在树脂上的主要剩下栀子黄、栀子苷和部分绿原酸，为下一步的分离提供了极大的方便。

实验表明，用30％乙醇可使柱上的栀子苷基本洗脱下来，而大量栀子黄还吸附在柱上，如果以20％的乙醇先洗脱，收集洗脱液可得到杂质较多的栀子苷(50％左右)，再以30％乙醇洗脱，所得栀子苷纯度更高(60％以上)，其中含少量绿原酸。

(3)、栀子黄的制备

2中30％乙醇洗脱后，以3倍样品溶液体积的0.5％氢氧化钠溶液洗脱，继续用水洗脱至洗脱液呈中性，弃去洗脱液，用4倍95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，真空干燥即得栀子黄，色价＞250、OD＜0.8。

以3倍溶液0.5％氢氧化钠溶液洗脱是为了除去吸附在柱上的绿原酸，洗后栀子黄中绿原酸含量极少。栀子黄作为副产品可用作食品添加剂、色素等。

(4)、大孔树脂的再生

将3中大孔树脂柱继续用乙醇洗脱至洗脱液几近无色，即可，下次使用前再用5倍以上水洗脱至几近无色。

(5)、栀子苷的初步精制

将2中所述细粉加适量水溶解，使体积与相应药材比例为1∶1，或2中溶液，上已处理好的AB-8大孔树脂柱，控制流速0.5-0.8ml/min，使栀子苷充分吸附，再以2倍溶液体积的水洗脱，弃去洗脱液，以3倍溶液0.25％氢氧化钠溶液洗脱，继续用水洗脱至洗脱液呈中性，弃去洗脱液，以30％乙醇继续洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，粉碎，得栀子苷，含量达80％以上。

继续用4倍95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，即得栀子黄，色价＞300、OD＜0.4。

(5)、栀子苷的再次精制

取2或4中栀子苷粉，加入50倍的丙酮加热使栀子苷充分溶解，趁热过滤，取滤液回收丙酮并浓缩至1∶5，冷藏，有结晶析出，过滤，干燥，即得栀子苷纯品，含量95％以上。

(6)监控方法

A、高效液相色谱法

色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为真充剂，乙腈-水(12∶88)为流动相，检测波长238nm。