[发明专利]一株产咖啡酸的刺五加内生细菌

说明书

技术领域

本发明涉及一株内生细菌。

背景技术

植物内生菌是一个多样性十分丰富的微生物类群，它们生活在健康植物的各种组织和器官内部的细胞或细胞间隙内而不引起植物病变，是与寄主植物在长期的共同进化过程中建立起互惠共存、相互制约的和谐联合关系的一类微生物。近年来，植物内生菌作为一种新的微生物资源引起了广泛。

植物内生细菌是产生活性物质和新化学物质的潜在资源，不但可以帮助维护人类健康，也可以维护动物和植物的健康。药用植物本身就能产生多种活性物质，实验研究表明，植物与内生细菌在相互作用的过程中，有内生细菌能产生与植物相同或相似的活性物质，因此从药用植物中分离到产生活性物质的内生细菌已成为当今学者的研究趋势。

发明内容

本发明提供了一株产咖啡酸的刺五加内生细菌。

产咖啡酸的刺五加内生细菌，它为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CX33，属于芽孢杆菌属(Bacillus)，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M2011078，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2011年3月22日；它为革兰氏阳性杆菌，长为2.0～3.0μm，宽为0.7～0.8μm，有芽孢、鞭毛和菌膜，在牛肉膏蛋白胨培养基上形成白色圆形菌落。

本发明中产咖啡酸的刺五加内生细菌，它为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CX33，其淀粉水解呈阳性、明胶液化呈阳性、接触酶试验呈阳性、脂酶试验呈阴性、甲基红呈阴性、乙酰甲基甲醇反应呈阳性，生长温度为10～50℃，最适生长温度为40℃，生长耐盐度为0.5％～20％，生长耐盐度为2％，最适生长pH值为6.8～7.6。

本发明中产咖啡酸的刺五加内生细菌，它为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CX33，其16S rDNA序列通过GENBANK序列比对，CX33与序列号为AB199317.1的枯草芽孢杆菌TCCC11021菌株序列相似性达到99％，结合细菌形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果，确定枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CX33为芽孢杆菌属的一个新菌种。

本发明中产咖啡酸的刺五加内生细菌，它为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CX33，属于芽孢杆菌属(Bacillus)，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M2011078，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2011年3月22日。

本发明利用微生物制药手段提取分离刺五加健康植株的内生细菌，以抑菌活性为指标，采用滤纸片法进行抑菌实验，筛选得到某些抑菌活性较强的目的菌株，并以薄层层析法，HPLC法为分析手段，从刺五加内生细菌中找到能够产生活性成分的菌株，并从其发酵液中提取分离活性物质，测定其活性代谢产物，最后将获得的目的菌株通过形态学观察、生理生化实验测定和16S rDNA序列分析鉴定其种属。

本发明中产咖啡酸的刺五加内生细菌，它为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CX33，其代谢物具有较好的抑菌活性，可为新型抗菌药物的筛选提供参考；同时从其代谢物中发现其含有咖啡酸，咖啡酸为止血升白细胞药，具有收缩增固微血管、提高凝血因子的功能、升高白细胞和血小板的作用，用于外科手术时预防出血或止血，以及内科、妇产科等出血性疾病的止血。也用于各种原因引起的白细胞减少症、血小板减少症。本发明对采用刺五加内生细菌CX33生产咖啡酸具有指导意义。

附图说明

图1为具体实施方式一中咖啡酸对照品的HPLC色谱图，其中a表示咖啡酸；图2为具体实施方式一中供试品的HPLC色谱图，其中a表示供试品CX33；图3为具体实施方式一中加入对照品后供试品的HPLC色谱图，其中a表示加咖啡酸后供试品CX33a。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式产咖啡酸的刺五加内生细菌，它为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CX33，属于芽孢杆菌属(Bacillus)，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M2011078，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2011年3月22日；它为革兰氏阳性杆菌，长为2.0～3.0μm，宽为0.7～0.8μm，有芽孢、鞭毛和菌膜，在牛肉膏蛋白胨培养基上形成白色圆形菌落。

本实施方式中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CX33，其进行常规生理生化鉴定，实验结果为：淀粉水解呈阳性、明胶液化呈阳性、接触酶试验呈阳性、脂酶试验呈阴性、甲基红呈阴性、乙酰甲基甲醇反应呈阳性。