[发明专利]利用维管特异启动子控制人工合成的抗菌肽基因的植物表达载体及其培育抗黄萎病棉花的方法

权利要求书

1.利用维管特异启动子控制人工合成的抗菌肽基因的植物表达载体，其特征在于，为含有维管特异启动子AAP2控制人工合成抗菌肽基因spCEMA的植物表达载体；提取拟南芥总DNA后进行PCR扩增，再与pUC-T载体连接，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆得到拟南芥AAP2基因的启动子，然后以其取代植物表达载体p5-spCEMA上的组成型启动子CaMV35S，构建一个新的植物表达体，命名为p5-AAP2-spCEMA。

2.利用维管特异启动子控制人工合成的抗菌肽基因的植物表达载体，其特征在于，为含有维管特异启动子AAP2控制人工合成抗菌肽基因spCEMA的植物表达载体，以来自拟南芥AAP2基因的启动子取代植物表达载体p5-spCEMA上的组成型启动子CaMV35S，构建一个新的植物表达体，命名为p5-AAP2-spCEMA。

3.根据权利要求1或2所述的植物表达载体，利用电击法转化根癌农杆菌，获得的含有所述p5-AAP2-spCEMA的重组菌。

4.根据权利要求1或2所述的植物表达载体，利用根癌农杆菌介导法进行遗传转化，获得的含有所述p5-AAP2-spCEMA植物表达载体的转基因细胞系。

5.权利要求1或2所述的植物表达载体在制备转基因抗黄萎病棉花中的应用。

6.权利要求1或2所述的植物表达载体在制备抗维管束病害转基因植物中的应用。

7.含有权利要求1或2所述植物表达载体的转基因棉花制备方法，包括下列步骤：

步骤1：将维管特异启动子AAP2序列、抗菌肽基因spCEMA序列可操作地分别插入表达载体中，构建植物表达载体；

步骤2：将步骤1所述植物表达载体转入宿主根癌农杆菌，获得转化体；

步骤3：通过转化体将植物表达载体整合入棉花内，获得转基因棉花；

步骤4：转基因棉花经室内抗病鉴定和性状分离筛选，获得抗病性状稳定遗传的纯合型转基因棉花；

步骤5： 抗病性遗传稳定的纯合型转基因棉花再经田间抗病鉴定和筛选，获得抗黄萎病的转基因棉花新资源。

8.一种培育抗黄萎病棉花的方法，其特征在于，将权利要求1或2所述植物表达载体分别转入棉花基因组，实现抗菌肽基因在转基因棉花维管组织中特异表达，提高棉花对黄萎病的抗病能力。