[发明专利]用于测定甲型H1N1流感病毒全基因序列的引物及测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及甲型H1N1流感病毒检测技术，具体地说，涉及一种用于测定甲型H1N1流感病毒全基因序列的引物及其试剂盒。

背景技术

流行性感冒（流感）是由流行性感冒病毒（流感病毒）的引起的呼吸系统传染病。流感病毒属于正粘病毒科，是负单链RNA病毒。流感病毒根据核蛋白（Nucleoprotein, NP）和基质蛋白（Matrix protein, MP）抗原性的不同分为甲、乙、丙三种分型，均可以感染人。其中甲型流感病毒的变异能力最强，能引起流感季节性流行或流感大流行。乙型流感病毒变异能力较弱，一般起流感季节性流行。丙型流感病毒抗原性比较稳定，较少引起流行。

甲型流感病毒自1918年从鸟类进入人际传播，引起西班牙流感大流行。甲型流感病毒通过抗原漂移和抗原转换发生变异，产生病毒变异株或新的病毒亚型，是甲型流感病毒在人群引起季节性流行的流感大流行的主要原因。人际流行毒株和禽流感病毒通过抗原转换发生重组，引起1957年和1968年两次流感大流行，分别把H2N2和H3N2两种流感病毒亚型带入人群中。流感大流行使一种病毒亚型持续在人群中传播，引起季节性流感流行直至下一次流感大流行。H1N1自1957年停止在人群中传播，1977年重新进入人际流行。H2N2自1968年后不在人群中流行。目前H1N1和H3N2两种甲型流感病毒同时在人群中流行。

甲型流感病毒的病毒体结构主要包括包膜和核衣壳。病毒体包膜上镶嵌着两种糖蛋白：血凝素（Hemagglutinin, HA）和神经氨酸酶（Neuraminidase, NA）。目前已鉴定了16种HA（H1-H16）和9种NA（N1-N9）。甲型流感病毒通过HA和NA不同的组合方式而形成多种亚型，如曾在人群中流行的H1N1、H2N2和H3N2。病毒核衣壳位于病毒体的核心，主要成分是由病毒RNA和NP组成的核糖核蛋白（ribonucleoprotein, RNP），在RNP上附着着RNA聚合酶复合体蛋白（PB1, PB2和PA）。甲型流感病毒基因组包括8个基因片段，编码11种蛋白质：HA，NA，NP，M1，M2，PA，PB1，PB2，PB1-F2和，PB2，以及两个非结构蛋白（nonstructural protein, NS）NS1，NS2（NEP）。

2009年4月，从墨西哥和美国的流感患者身上鉴定一种新的猪源H1N1流感病毒。随着新甲型H1N1在世界范围迅速传播，世界卫生组织（World health organization, WHO）于2009年6月11日宣布将流感大流行警戒级别提升至最高级别6级，宣布流感疫情进入全球大流行阶段。在流感大流行的初期进行病毒传播的密切监测，及时发现病例，迅速进行鉴定，对减低流感大流行的危害具有十分重要的意义。

根据流感流行的规律，新的流感变异株产生后，世界各国的人口聚居地都会先出现输入性病例传入，继而相继蔓延为以本地感染为主的社区流行和地域大流行。在这次甲型H1N1流感当中，包括我国在内的一些国家由于早期采取了严格的防控措施，有效推迟了本土病例的传播，为药物储备和疫苗研发争取到了宝贵的时间。本研究组参与甲型H1N1流感的广东省的密切监测。2009年5月18日成功对广东首例输入性甲型H1N1流感疑似病例进行第一时间核酸检测，确定传染源，对寻找、隔离密切接触者的工作赢得宝贵时间。但是我们也发现根据WHO推荐的46对全基因测序引物（http://www.who.int/csr/disease/ swineflu/en/index.html），出现三分之一以上的引物特异性差及灵敏度低的现象，严重影响对甲型H1N1流感病毒全基因序列测定监控的进展。

发明内容

为了克服现有技术缺陷，本发明提供了一种能用于测定甲型H1N1流感病毒全基因序列的引物。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于测定甲型H1N1流感病毒全基因序列的引物，包含48对特异性引物，48对特异性引物分成12组用于检测甲型H1N1流感病毒HA片段全基因编码序列，甲型H1N1流感病毒HA片段全基因包括HA，NA，NP，M1，M2，PA，PB1和PB2 八个片段；