[发明专利]用于测定甲型H1N1流感病毒全基因序列的引物及测定方法有效
| 申请号： | 201110058953.X | 申请日： | 2011-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN102140544A | 公开（公告）日： | 2011-08-03 |
| 发明（设计）人： | 黎孟枫;曹开源;吴珏珩;朱勋;何振健;袁洁;李隽;张定梅;徐霖;杨纨;李蔓英 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 陈卫 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 测定 h1n1 流感病毒 基因 序列 引物 方法 | ||
1.一种用于测定甲型H1N1流感病毒全基因序列的引物，其特征在于，包含48对特异性引物，48对特异性引物分成12组用于检测甲型H1N1流感病毒HA片段全基因编码序列，甲型H1N1流感病毒HA片段全基因包括HA，NA，NP，M1，M2，PA，PB1和PB2 八个片段；
第1组用于检测和鉴定甲型H1N1流感病毒HA基因片段的引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：11所示核苷酸序列，其下游引物相对应如SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：12所示核苷酸序列；
第2组用于检测和鉴定甲型H1N1流感病毒NP基因片段的引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：19，SEQ ID NO：21所示核苷酸序列，其下游引物相对应如SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：22所示核苷酸序列；
第3组物用于检测和鉴定甲型H1N1流感病毒NA基因片段的引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：25，SEQ ID NO：27，SEQ ID NO：29，SEQ ID NO：31所示核苷酸序列，其下游引物相对应如SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：28，SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：32所示核苷酸序列；
第4组用于检测和鉴定甲型H1N1流感病毒M基因片段的引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：33，SEQ ID NO：35，SEQ ID NO：37，SEQ ID NO：39所示核苷酸序列，其下游引物相对应如SEQ ID NO：34，SEQ ID NO：36，SEQ ID NO：38，SEQ ID NO：40所示核苷酸序列；
第5组用于检测和鉴定甲型H1N1流感病毒NS基因片段的引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：41，SEQ ID NO：43，SEQ ID NO：45所示核苷酸序列，其下游引物相对应如SEQ ID NO：42，SEQ ID NO：44，SEQ ID NO：46所示核苷酸序列；
第6组用于检测和鉴定甲型H1N1流感病毒PB2基因片段的引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：47，SEQ ID NO：49，SEQ ID NO：51，SEQ ID NO：53，SEQ ID NO：55，SEQ ID NO：57，SEQ ID NO：59，SEQ ID NO：61，SEQ ID NO：63所示核苷酸序列，其下游引物相对应如SEQ ID NO：48，SEQ ID NO：50，SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：54，SEQ ID NO：56，SEQ ID NO：58，SEQ ID NO：60，SEQ ID NO：62，SEQ ID NO：64所示核苷酸序列；
第7组用于检测和鉴定甲型H1N1流感病毒PB1基因片段的引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：65，SEQ ID NO：67，SEQ ID NO：69，SEQ ID NO：71，SEQ ID NO：73，SEQ ID NO：75，SEQ ID NO：77，SEQ ID NO：79所示核苷酸序列，其下游引物相对应如SEQ ID NO：66，SEQ ID NO：68，SEQ ID NO：70，SEQ ID NO：72，SEQ ID NO：74，SEQ ID NO：76，SEQ ID NO：78，SEQ ID NO：80所示核苷酸序列；
第8组用于检测和鉴定甲型H1N1流感病毒PA基因片段的引物核苷酸序列，其上游引物如SEQ ID NO：81，SEQ ID NO：83，SEQ ID NO：85，SEQ ID NO：87，SEQ ID NO：89，SEQ ID NO：91，SEQ ID NO：93，SEQ ID NO：95所示核苷酸序列，其下游引物相对应如SEQ ID NO：82，SEQ ID NO：84，SEQ ID NO：86，SEQ ID NO：88，SEQ ID NO：90，SEQ ID NO：92，SEQ ID NO：94，SEQ ID NO：96所示核苷酸序列。
2.一种甲型H1N1流感病毒全基因序列的测定方法，其特征在于，采用常规PCR技术扩增样品的核酸片段，PCR总体系中添加各种引物浓度为0.2 μmol/l，PCR运行条件为： 95 ℃预变性，5 min；95 ℃变性，30 s；55 ℃退火，30 s；72 ℃延伸，60 s；回到步骤2，重复循环30次；72 ℃，10 min。
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