[发明专利]粮食及其加工副产物中脂肪酶活力的快速测定方法

权利要求书

1.粮食及其加工副产物中脂肪酶活力的快速测定方法，其特征在于按照下述步骤进行：

（1）待测粮食及其加工副产物样品经粉碎后，过30目筛，取筛下物，加入5～10倍体积的有机溶剂置于气浴摇床中，以100～250rpm振荡脱脂20～120min；

（2）倾斜倒出脱脂的溶酶后，将样品置于烘箱中，20～60℃热风烘干0.5～3h去除残余溶酶，取出放入干燥器中；

（3）称取步骤（2）干燥后的样品适量，分别置于两试管中，一只空白A_i，另一只为A_f，往每只试管中分别加入0～2.5倍质量的蒸馏水或30℃以下低温烘干0.5～6h，调节其水分活度为0.6～0.9；再加入0.2～2.5倍质量的橄榄油，将三者充分搅拌均匀；

（4）取步骤（3）空白管A_i中的试样，立即加入1~10倍体积的有机溶剂，涡旋振荡30秒，然后5000rpm离心3min，上清液倒入圆底烧瓶中，反复提取2～3次；

（5）取步骤（3）样品管A_f中的试样，25～75℃下，培养1～8h后，取出，加入1～10倍体积的有机溶剂，振荡30秒，然后5000rpm转速下离心3min，上清液倒入圆底烧瓶中，反复提取2～3次；

（6）将步骤（4）、（5）得到的提取液在40℃以下减压蒸发，除去有机溶剂；剩余固形物溶于0.5～3倍样品质量的异辛烷后，加入1～2倍异辛烷体积的5%醋酸铜溶液振荡1min，4000rpm离心2~10min，获得有机相与水相，其中所述的5%醋酸铜溶液使用前用吡啶调节其至pH5.5～6.5；

（7）经过步骤（6）获得的有机相，在715nm下测其吸光度值，试样吸光值与油酸异辛烷标准溶液的吸光值做比较；

（8）将步骤（7）中得到的吸光度值，代入下式计算脂肪酶活力：

其中LA = 脂肪酶活动度（U/g）；

1000为从 mol/L 到 μmol/mL的转换系数；

4为用于重溶油脂的异辛烷的体积（mL）；

v为加入橄榄油的体积（mL）；

A_f 为在715nm下经过培养的样品的吸光度；

A_i为在715 nm下空白样品的吸光度；

ε为油酸在715 nm下的摩尔吸光系数（M^?1·cm^?1）；

t 为培养时间（h）；

l 为路径长度（cm）；

s 为 样品干重（g）。

2.根据权利要求1所述的粮食及其加工副产物中脂肪酶活力的快速测定方法，其特征在于其中上述测定过程中所用的橄榄油需要进行预先纯化，按照下述步骤进行：往橄榄油中边搅拌边加入约10～30％（W/V）的氧化铝，1h内每隔10～15分钟搅拌混合物一次；静置，待氧化铝沉淀后，过滤获得纯化的橄榄油；取一定量纯化橄榄油，加入1～3倍橄榄油体积的乙醚和1～3倍橄榄油体积的95%乙醇，以酚酞为指示剂，用0.05N的NaOH滴定，如果碱的用量超过橄榄油体积的1/10，重复纯化橄榄油一次。

3.根据权利要求1所述的粮食及其加工副产物中脂肪酶活力的快速测定方法，其特征在于其中所述步骤（3）中调节其水分活度为0.7～0.8；其中所述步骤（5）中样品管A_f中的试样， 30～55℃，培养2～4h后，取出，加入1～10倍体积的有机溶剂，振荡30秒，然后5000rpm转速下离心3min，上清液倒入圆底烧瓶中，反复提取2～3次；

根据权利要求1所述的粮食及其加工副产物中脂肪酶活力的快速测定方法，其特征在于其中所述的有机溶剂是指正己烷、乙醚或乙酸乙酯。

4.根据权利要求1所述的粮食及其加工副产物中脂肪酶活力的快速测定方法，其特征在于其中所述的检测对象、橄榄油和蒸馏水三者混合方法是采用臼式研磨仪或电动匀浆机混合仪器进行混和。

5.根据权利要求1所述的粮食及其加工副产物中脂肪酶活力的快速测定方法，其特征在于其中所述的粮食及其加工副产物为小麦、稻谷、玉米、大豆、小麦胚芽、麸皮、米糠、糙米、玉米胚芽或大豆胚芽。