[发明专利]一种检测结核分枝杆菌耐药性的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种鉴定结核杆菌耐药性的专用引物，其由一个以上引物组组成，每个所述引物组针对一种耐药基因，所述每个引物组扩增的靶序列为包括突变位点在内的所有等位基因片段；

每个所述引物组包括用于扩增所述靶序列的特异性引物和一条共用引物。

2.根据权利要求1所述的专用引物，其特征在于：

所述耐药基因为耐利福平基因和/或耐异烟肼基因。

3.根据权利要求1或2所述的专用引物，其特征在于：

所述特异性引物的3’末端碱基与所述等位基因片段的突变位点的碱基相同或互补。

4.根据权利要求1-3中任一所述的专用引物，其特征在于：

所述专用引物由如下3个引物组组成：

用于扩增耐利福平基因的引物组由4条用于扩增GenBank Accession Number为NC_000962第759807-763325位核苷酸的rpoB基因的511CTG→CCG、526CAC→GAC、531TCG→TTG、533CTG→CCG突变位点分别对应的等位基因片段的特异性引物和1条共用引物1组成；

所述4条用于扩增GenBank Accession Number为NC_000962第759807-763325位核苷酸的rpoB基因的511CTG→CCG、526CAC→GAC、531TCG→TTG、533CTG→CCG突变位点分别对应的等位基因片段的特异性引物的核苷酸序列分别为序列表中序列5、4、3和2；

所述共用引物1的核苷酸序列为序列表中序列1；

用于扩增耐异烟肼基因的引物组A由1条用于扩增GenBank Accession Number为NC_000962第1674202-1675011位核苷酸的inhA基因的inhA-15T突变位点对应的等位基因片段的特异性引物和1条共用引物2组成；

所述用于扩增GenBank Accession Number为NC_000962第1674202-1675011位核苷酸的inhA基因的inhA-15T突变位点对应的等位基因片段的特异性引物的核苷酸序列为序列表中序列7；

所述共用引物2的核苷酸序列为序列表中序列6；

用于扩增耐异烟肼基因的引物组B由2条用于扩增GenBank Accession Number为NC_000962第2153889-2156111位核苷酸的katG基因的315AGC→AAC、315AGC→ACC突变位点分别对应的等位基因片段的特异性引物和共用引物3组成；

所述用于扩增GenBank Accession Number为NC_000962第2153889-2156111位核苷酸的katG基因的315AGC→AAC、315AGC→ACC突变位点分别对应的等位基因片段的特异性引物的核苷酸序列分别为序列表中序列9和序列10；

所述共用引物3的核苷酸序列为序列表中序列8。

5.一种检测结核杆菌的耐药性的试剂，由权利要求1-4中任一所述的专用引物和专用探针组成；

所述专用探针的数目与所述引物组的数目相同，一种所述专用探针与权利要求1-4中任一所述的专用引物中的一个引物组扩增的靶序列特异结合。

6.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于：

所述耐药性为耐利福平和/或耐异烟肼。

7.根据权利要求5或6所述的试剂，其特征在于：

所述专用探针均为荧光标记探针，所述荧光标记探针的标记物具体为荧光素。

8.根据权利要求5-7中任一所述的试剂，其特征在于：

所述荧光素为6-羧基荧光素或六氯荧光素。