[发明专利]新大环内酯及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物工程技术领域，具体涉及从黑翅土白蚁Odontotermes formosanus (Shiraki)内生放线菌的发酵液中提取到的新大环内酯(deminamicin) 及其制备方法与应用。

背景技术

放线菌能产生多种生物活性物质，它为抗生素工业的建立和发展发挥过巨大作用。经过多年的研究，从放线菌中分离得到的先导化合物数量锐减，发现新抗生素的几率也大大降低。来源于特殊生境的放线菌引起了一些研究者的兴趣，研究特境放线菌的次生代谢产物成为筛选新型抗生素的一条重要途径。昆虫是地球上一类分布广泛、种类和数量巨多的生物资源，昆虫肠道内生存着无数微生物，昆虫种类、数量及分布的多样性造就了昆虫肠道内生菌的多样性。昆虫肠道放线菌是一类特境放线菌，人们对其次生代谢产物的研究较少。

白蚁以各种树木为食，它们能消化难以分解的树木纤维，白蚁肠道内的微生物在白蚁消化树木纤维的过程中发挥着很大作用。然而，到目前为止，尚未见对白蚁内生放线菌次生代谢产物的研究报道。

发明内容

本发明需要解决的问题是：

1.      提供一种白蚁内生放线菌；

2.      具有抗菌活性的新大环内酯(deminamicin)；

3.      提供一种提取、分离deminamicin的方法；

4.      提供新大环内酯(deminamicin)在开发抗生素药物中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案予以实现。

deminamicin的结构为：

deminamicin

deminamicin的制备方法，它包括下述步骤：

步骤1. 将新鲜的从黑翅土白蚁(Odontotermes formosanus)肠道中分离、纯化得到的放线菌（BY-4）菌体块接种到在高氏1号培养基（可溶性淀粉20 g，KNO₃ 1 g，NaCl 0.5 g，K₂HPO₄·3H₂O 0.5 g，MgSO₄·7H₂O 0.5 g，FeSO₄·7H₂O 0.01 g，1 L 蒸馏水）上，在140 rpm、28℃条件的摇床上培养5天作为种子液；

步骤2. 将种子液接种于高氏1号培养基中，在140 rpm、28℃条件下发酵14天；

步骤3. 将步骤2所得发酵液经纱布过滤，滤液用乙酸乙酯萃取4次，真空浓缩干燥得黑色粗浸膏F1；

步骤4. 将粗浸膏F1悬浮于水，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，所得乙酸乙酯萃取液经浓缩得浸膏F2；

步骤5. 对浸膏F2进行硅胶柱层析，依次用4倍体积的氯仿、氯仿：甲醇=100:1、氯仿:甲醇=100:2、氯仿:甲醇=100:4、氯仿:甲醇=100:8、氯仿:甲醇=100:16和甲醇进行洗脱，浓缩100:4（氯仿:甲醇）段得到黑色浸膏F3；

步骤6. 然后对浸膏F3进行Sephadex LH-20分离（洗脱液为甲醇），共得11瓶，将7-9瓶合并得浸膏F4；

步骤7. 对浸膏F4，用反相硅胶柱进行分离，先用20%甲醇（酒精计测量）进行洗脱除去大极性杂质，然后用45%甲醇洗脱，真空浓缩洗脱液得褐色固体F5；

步骤8. 用高压液相色谱法（色谱柱：Allsphere ODS-2.5 mm (250R4.6 mm) column）在流动相为51%甲醇（酒精计测量）、波长为210 nm、流速为2.0 mL/min的条件下对浸膏F5进行分离，共出现6个主要成分，保留时间为32.9 min的第4成分为deminamicin。

本发明的新大环内酯deminamicin对厌氧菌具有较强的抑制作用，特别是对幽门螺旋杆菌标准菌有很强的抑制作用，deminamicin可作为一种新颖的抗生素，制备新抗生素药物。

与现有技术相比，本发明具有下述突出优点：

1. 本发明的deminamicin是结构新颖的化合物，可以作为抗生素或先导化合物，制备成新型抗生素药物；

2. 本发明的deminamicin可以利用微生物进行液体发酵生产，工艺简便，周期短，成本低，来源有保证。

具体实施方式

通过下面给出的具体实施例可以进一步了解本发明。但它们不是对本发明的限定。