[发明专利]含有核酸的脂质粒子及相关的方法

说明书

【技术领域】

本申请要求2009年11月4日提交的美国临时申请No.61/280,510的权益，将其通过引用整体并入本文。

【背景技术】

脂质纳米粒子(LNP)是接收了调控批准的最临床进展的具有基于7个LNP的药物的药物递送系统。这些批准的药物含有小分子诸如抗癌药物及相比″游离的″药物呈现改善的功效和/或减少的毒性。LNP载体技术也已应用于递送″遗传″药物诸如用于表达治疗性蛋白或用于沉默贡献于疾病进展的基因的小干扰RNA(siRNA)寡核苷酸(OGN)的质粒。siRNA OGN和其他遗传药物的有效体内递送的作出方法是阻碍这些剂作为治疗剂的革命性的潜力的主要问题。

遗传药物的包裹和递送需要的LNP技术的新近发展及阳离子脂质的设计点亮了LNP系统解决体内递送问题的潜力。LNP-siRNA系统已显示在静脉内(静脉内)注射之后诱导动物模型，包括非-人灵长类动物中治疗关联的靶基因的沉默，且目前在几个临床试验中评估下。

已开发各种方法来配制含有遗传药物的LNP系统。这些方法包括在乙醇的存在下混合预形成的LNP与OGN或混合溶解于乙醇的脂质与含有OGN的水性介质和得到具有100nm或更小的直径的LNP和65～95％的OGN包裹效率。这些方法均依赖于阳离子脂质的存在，以达到OGN和聚(乙二醇)(PEG)脂质的包裹，以抑制大结构的聚集和形成。产生的LNP系统的性质，包括尺寸和OGN包裹效率，敏感于各种制剂参数诸如离子强度，脂质和乙醇浓度，pH，OGN浓度及混合速度。一般而言，使用当前制剂过程难于控制参数诸如在混合时的相对脂质和OGN浓度，以及混合速度，导致在制备物之内及之间 产生的LNP的特征的变异性。

微流体装置提供以nl尺度控制性地和快速混合流体的能力，精确控制温度，驻留时间和溶质浓度。控制的及快速微流体混合已之前应用于合成无机纳米粒子和微粒，及可胜过纳米粒子的大规模产生中的大规模系统。微流体2-相滴技术已应用于产生单分散聚合物微粒用于药物递送或用于产生用于细胞包裹的大囊泡，蛋白或其他生物分子。已展示水动力流聚焦，常见的微流体技术的使用以提供试剂的快速混合，以创建控制的尺寸的单分散脂质体。此技术也已证明相比本体产生方法，对于随着小分子的更高包裹，获得更小，更多单分散粒子的聚合物纳米粒子的产生有用。

尽管含有遗传药物的LNP系统的方法的开发的发展，存在对制备含有治疗性物质的脂质纳米粒子的装置和方法，以及改善的含有治疗性物质的脂质纳米粒子的需求。本发明寻求实现此需求及提供进一步相关的优势。

【发明概述】

一方面，本发明提供包含核酸的脂质粒子。

在一实施方式中，脂质粒子包含(a)一种或更多阳离子脂质，(b)一种或更多第2脂质，及(c)一种或更多核酸，其中脂质粒子包含基本上实体核心，如本文定义。

在一实施方式中，阳离子脂质是DLin-KC2-DMA。在特定实施方式中，粒子包含约30～约95摩尔百分率阳离子脂质。

在一实施方式中，第2脂质是PEG-c-DMA。在一实施方式中，第2脂质是1，2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DSPC)。在特定实施方式中，粒子包含约1～约10摩尔百分率第2脂质。

核酸可为DNA，RNA，锁核酸，核酸类似物，或能表达DNA或RNA的质粒。

在另一实施方式中，脂质粒子包含(a)一种或更多阳离子脂质，(b)一种或更多中性脂质，(c)一种或更多PEG-脂质，(d)一种 或更多甾醇；及(e)一种或更多核酸，其中脂质粒子包含基本上实体核心，如本文定义。在一实施方式中，阳离子脂质是DLin-KC2-DMA。在一实施方式中，PEG-脂质是PEG-c-DMA。在一实施方式中，中性脂质是1，2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DSPC)。在一实施方式中，甾醇是胆甾醇。在一实施方式中，核酸是siRNA。

在进一步实施方式中，脂质粒子由一种或更多阳离子脂质，及一种或更多核酸组成。在一实施方式中，脂质粒子包含基本上实体核心，如本文定义。在一实施方式中，阳离子脂质是DLin-KC2-DMA。在一实施方式中，核酸是siRNA。

在其他方面，本发明提供使用脂质粒子的方法。

在一实施方式中，本发明提供给受试者施用核酸的方法，包括施用本发明的脂质粒子给有需求的受试者。

在一实施方式中，本发明提供将核酸导入细胞的方法，包括使细胞接触本发明的脂质粒子。