[发明专利]对FMR1和FMR2基因5’非翻译区进行表征的PCR方法

权利要求书

1.分析样品中至少一种模板所包含的至少一种CGG富含区的方法，所述方法包括：

(a)提供至少两种不同引物，包括含有CGG、CCG、GCG、CGC、GCC或GGC重复的第一引物；和与CGG富含区之外的位点退火的第二引物；

(b)用所述至少两种不同引物和包含至少一种CGG富含区的至少一种模板进行PCR，其中所述PCR产生一组产物；

(c)利用分辨率高的技术将产物分开，产生产物大小和丰度的表现形式；以及

(d)得出关于所述至少一种CGG富含区中是否存在中断序列，或者中断序列在所述至少一种CGG富含区中处于何处的信息。

2.分析样品中至少一种模板所包含的至少一种CGG富含区的方法，所述方法包括：

(a)提供至少三种不同引物，包括含有CGG、CCG、GCG、CGC、GCC或GGC重复和5’侧翼的第一引物；与CGG富含区之外的位点退火的第二引物；和具有第一引物的5’侧翼所包含的序列的第三引物，其中第一引物提供的浓度低于第三引物；

(b)用所述至少三种不同引物和所述至少一种模板进行PCR，其中所述PCR产生一组产物；

(c)利用分辨率高的技术将产物分开，产生产物大小和丰度的表现形式；以及

(d)由上述表现形式得出关于所述至少一种CGG富含区中是否存在中断序列，或者中断序列在所述至少一种CGG富含区中处于何处的信息。

3.权利要求1或2中任一项所述的方法，包括由所述表现形式得出关于中断序列在CGG富含区中处于何处的信息。

4.权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述中断序列是AGG元件。

5.权利要求1或2中任一项所述的方法，进一步包括由所述表现形式得出关于CGG重复数目的信息。

6.权利要求5所述的方法，其中所述关于CGG重复数目的信息决定了CGG富含重复区包含多于还是少于200个CGG重复。

7.权利要求6所述的方法，其中所述关于CGG重复数目的信息决定了CGG富含区内存在的CGG重复数目。

8.权利要求1或2中任一项所述的方法，附带条件是由上述表现形式得出关于所述至少一种CGG富含区中是否存在中断序列，或者中断序列在所述至少一种CGG富含区中处于何处的信息时，没有使用外部标准或校准物。

9.权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述CGG富含区包含在FMR1的5’UTR中。

10.权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述CGG富含区包含在FMR2的5’UTR中。

11.权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述高分辨率技术可以将长度相差3个核苷酸或碱基对的产物区分开。

12.权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述高分辨率技术是毛细管电泳。

13.权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述表现形式是电泳图。

14.权利要求1或2中任一项所述的方法，其中从所述表现形式得出关于CGG富含区中是否存在中断序列、或者中断序列在所述CGG富含区中处于何处的信息，包括确定第一引物结合显著减少的位置。

15.权利要求1或2中任一项所述的方法，其中从所述表现形式得出关于CGG富含区中是否存在中断序列，或者中断序列在所述CGG富含区中处于何处的信息包括确定与相邻长度的产物量相比，产物的量明显减少的一个或多个长度。

16.权利要求1或2中任一项所述的方法，其中从所述表现形式得出关于CGG富含区中是否存在中断序列，或者中断序列在所述CGG富含区中处于何处的信息包括确定与相邻长度的产物量相比，产物的量减少至少50％的一个或多个长度。

17.权利要求1或2中任一项所述的方法，其中从所述表现形式得出关于CGG富含区中是否存在中断序列，或者中断序列在所述CGG富含区中处于何处的信息包括确定与相邻长度的产物量相比，产物的量减少至少90％的一个或多个长度。