[发明专利]含有增多的维生素K的细菌thyA(-)突变株

说明书

技术领域

本发明涉及含有增多的维生素K的细菌thyA(-)突变株，和这些thyA(-)突变株用于制造供治疗和/或预防哺乳动物(例如人)维生素K缺乏症之用的组合物/产品的用途。

背景技术

众所周知，在乳业上广泛使用乳酸菌(LAB)来制造不同的动物奶发酵产品，例如酸奶、奶酪等。

维生素K对于例如骨骼健康等众多人类/动物健康问题很重要。

乳酸菌乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)和乳明串珠菌(Leuconostoc lactis)是维生素K2[甲基萘醌类]的天然生产者(Morishita T等人，1999.Production of Menaquinones by Lactic Acid Bacteria.J.Dairy.Sci.82：1897-1903)。

维生素K2是细菌质膜的组成部分，也就是说，维生素K2存在于LAB的质膜中。

一般来说，野生型乳酸菌所产生的维生素K2的量不足以制造包含维生素K2的商业相关产品，例如具有足够高含量的维生素K2的乳制品。

因此，已经进行研究以鉴别能制造增加量的维生素K2的乳酸乳球菌突变株，参看例如WO2008/040793A1(Danone)。

此外，WO2008/040784A1(Danone)描述了，可通过在其中LAB不是处于生长期而是处于WO2008/040784A1(参看例如权利要求1)中所谓的“休止细胞”期的条件下，用LAB使奶发酵来提高维生素K2的产量。

基本上，这可以通过向奶中加入相对大量的LAB来获得。

所属领域中众所周知，当向奶中加入相对大量的LAB时，LAB几乎不生长(细胞分裂)，这是因为开始加入的大量LAB会迅速产生非常多的乳酸，以致于奶的pH会降到例如低于pH＝4的pH，而在所述低pH下，LAB不会显著生长。

换句话说，当向奶中加入大量LAB时，pH会迅速下降，以致于LAB没有“时间”进行生长(细胞分裂)。

所属领域技术人员已知thyA基因编码胸苷酸合成酶。如图1所示，当所述thyA基因在例如LAB中失活时，便得到所谓的胸苷营养缺陷型突变株，即不能在胸苷“有限”的培养基中进行细胞分裂的突变株，这是因为其在不加入胸苷的情况下无法合成dTTP，从而不能复制其基因组。众所周知，奶不包含大量的胸苷，且所述thyA(-)突变株因此不能在奶中显著生长。

WO00/01799A2(Chr.Hansen A/S)描述了以保藏编号DSM12891保藏的thyA(-)乳酸乳球菌突变株MBP71，并描述了所述thyA(-)菌株具有抗噬菌体性。

其没有描述或暗示所述thyA(-)突变株可用于产生增加含量的维生素K2。

此外，上文和下文引用的现有技术文献也没有描述或暗示可通过使LAB细胞中的thyA基因失活来提高维生素K2产量。

举例来说，以上讨论的WO2008/040793A1(Danone)提到可用于提高LAB中的维生素K2产量的许多基因(参看例如权利要求5)，但这些所述基因都不是thyA基因，或本发明中可被认为和thyA基因相似/相关的基因。

JP 2001 136959 A(2001年5月公开)涉及可用于预防和治疗骨质疏松症的枯草杆菌(Bacillus subtilis)微生物细胞培养物，其中所述微生物细胞在释放维生素K之前即被收集。骨质疏松症治疗效应可通过摄取含维生素K的微生物细胞来获得，其中所述微生物细胞可并入食物或医药产品中(参考摘要)。

JP 2000 080043 A(2000年3月公开)涉及用于预防骨质疏松症的口服药品/食品，其包含纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)的水溶性维生素K部分(参考摘要)。