[实用新型]索拉非尼药物靶向基因位点检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属生物技术领域，具体涉及检测索拉非尼药物靶向基因位点是否发生突变的试剂盒。 

背景技术

索拉非尼是一种新型多靶向性的治疗肿瘤的口服药物。其首要开发目标为用于治疗对标准疗法没有响应或不能耐受之胃肠道基质肿瘤和转移性肾细胞癌。能选择性地靶向某些蛋白的受体，后者被认为在肿瘤生长过程中起着一种分子开关样的作用。 

索拉非尼是一种多激酶抑制剂。临床前研究显示，索拉非尼能同时抑制多种存在于细胞内和细胞表面的激酶，包括RAF激酶、血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)、血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)、血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)、KIT和FLT-3。由此可见，索拉非尼具有双重抗肿瘤效应，一方面，它可以通过抑制RAF/MEK/ERK信号传导通路，直接抑制肿瘤生长；另一方面，它又可通过抑制VEGFR和PDGFR而阻断肿瘤新生血管的形成，间接抑制肿瘤细胞的生长。索拉非尼在临床前动物试验中显示了广泛的抗肿瘤活性。在美国和欧洲进行的治疗晚期肾癌的III期随机临床研究中，903例接受过一次系统治疗(生物免疫或化疗)失败的晚期肾癌病人随机分为两组，一组接受Sorafenib，另一组接受安慰剂治疗。中期分析时已发生222例死亡事件，结果表明两组的客观有效率分别为10％和2％，另分别有74％和53％的病人肿瘤保持稳定。Sorafenib组的无进展生存期较安慰剂组延长一倍(5.8vs2.8个月，风险比为0.51)，且Sorafenib较安慰剂治疗显著改善了病人的生活质量。索拉非尼是目前世界上第一个被批准应用于临床的一个多靶点的靶向治疗药物。目前正在由中国医学科学院肿瘤医院的孙燕院士作为主要研究者在亚洲开展临床试验，试验的主要对象是有病理证实的无法手术切除和/或转移的晚期肾透明细胞癌，这些患者既往最多可以接受过一次系统的治疗。 

国内外大量的关联研究表明，索拉非尼的药物疗效靶向基因包括RAF激酶(RAF)、血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)、血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)和血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)。 

荧光定量PCR是近几年来兴起的生物学技术，具有准确性高、重现性好等特点，已广泛用于基因表达研究、SNP位点分析等诸多领域，该方法采用完全闭管检测，省去了对PCR产物后处理，避免了交叉污染，结果判断有计算机完成，简化了操作步骤，并增加了结果的可靠性。是一种简便快速检测SNP位点基因型的方法。 

发明内容

本实用新型针的目的是提供一种采用荧光定量PCR技术同时检测四个索拉非尼药物靶向基因SNP位点的试剂盒。该试剂盒由包装盒体、衬垫、装有检测四个SNP位点的荧光定量PCR反应液的四个试管、装有阳性对照品的一个试管、装有阴性对照品的一个试管组成，衬垫上设有容器孔，分别放置四管荧光定量PCR反应液、阳性对照品和阴性对照品。 

其中荧光定量PCR反应液的成分包含：PCR缓冲液、MgCl₂、dNTPs、SNP位点检测用上游引物、SNP位点检测用下游引物、SNP位点基因型一荧光探针、SNP位点基因型二荧光探针、Taq DNA聚合酶。 

其中， 

RAF激酶(RAF)上的SNP位点检测引物和探针为： 

上游引物序列：5’-GTGTTAAGTGAGAAGGTGAT-3’ 

下游引物序列：5’-AGGATAGCCAGGAAGAGAAA-3’ 

基因型一荧光探针序列：5’-FAM-GACCgTTGCCC-TAMRA-3’ 

基因型二荧光探针序列：5’-VIC-AGACCaTTGCCC-TAMRA-3’ 

血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)上的SNP位点检测引物和探针为： 

上游引物序列：5’-CCTGGTGGACATGGTGAATGAC-3’ 

下游引物序列：5’-CCGCCTCATAGTTGGTGTAGATG-3’ 

基因型一荧光探针序列：5’-FAM-TGCAAATACaTCTCCC-TAMRA-3’ 

基因型二荧光探针序列：5’-VIC-TGCAAATACgTCTCCC-TAMRA-3’ 

血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)上的SNP位点检测引物和探针为： 

上游引物序列：5’-GAACTCCCTGAAAAGCTAAGC-3’ 

下游引物序列：5’-GTTGGGCTCAAATATACGGTGG-3’