[发明专利]解淀粉芽孢杆菌LS05漆酶及其应用

权利要求书

1.解淀粉芽孢杆菌LS05，在中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CGMCC No.4264。

2.一种芽孢漆酶，该漆酶由权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌LS05(Bacillus amyloliquefaciens)产生的。

3.根据权利要求2所述的芽孢漆酶的制备，其特征在于按下列步骤进行：

a.解淀粉芽孢杆菌LS05划线接种于固体产孢培养基上，37℃倒置培养5d后，所述的产孢培养基组份为(g/L)：营养肉汤8；KCl 1；MgSO₄·7H₂O 0.25；MnCl₂·4H₂O 0.002；琼脂17；调pH7.0后高温高压灭菌，加入过滤除菌的0.5mmol/L CaCl₂及0.001mmol/L FeSO₄；

b.用无菌去离子水将固体培养基上的芽孢冲洗下来；

c.加入终浓度0.1mg/mL的溶菌酶，37℃水浴10min；

d.依次用含有10mmol/L EDTA和0.3mg/mL PMSF的1mol/L NaCl、0.14mol/L NaCl、0.1％(w/v)SDS和无菌去离子水清洗一遍；

e.80℃热击10min后用无菌去离子水清洗三遍后，装入灭菌后的三角瓶中4℃避光保存。

4.根据权利要求2和3所述的芽孢漆酶，可在pH 2.2-10.0发挥作用，在30℃时催化底物ABTS的最适pH值为3.0，催化底物丁香醛连氮的最适pH值为6.6，催化底物2，6-二甲氧基苯酚的最适pH值为8.6。

5.根据权利要求2至4所述的芽孢漆酶，可在20-100℃发挥功能，在pH 6.6以丁香醛连氮为底物时最适反应温度为70℃。

6.根据权利要求2至5所述的芽孢漆酶，可对不同结构的合成染料包括RBBR(Remazol Brilliant Blue R，CAS No：2580-78-1)，活性黑KN-B(CAS No：17095-24-8)，结晶紫(CAS No：548-62-9)和靛红(CAS No：860-22-0)进行脱色，脱色条件为：40℃，pH 6.6或9.0，芽孢漆酶悬液的终浓度是1mg/ml，染料终浓度分别为RBBR 100mg/L，活性黑KN-B 40mg/L，靛红25mg/L，结晶紫5mg/L，加入终浓度是0.1mmol/L的漆酶介体乙酰丁香酮。

7.解淀粉芽孢杆菌具有漆酶活性的基因，是下列核苷酸序列之一：

1)序列表中SEQ ID No：1的DNA序列；

2)编码序列表中SEQ ID No：2蛋白质序列的多核苷酸；

3)与序列表SEQ ID No：1限定的DNA序列具有90％以上的同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列。

8.根据权利要求7所述的基因，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)漆酶基因是序列表中SEQ ID No：1。

9.解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)漆酶，是具有序列表中SEQ ID No：2氨基酸残基序列的蛋白质。