[发明专利]表达高致病性禽流感病毒H5亚型血凝素蛋白的重组嗜酸乳杆菌

权利要求书

1.高致病性禽流感病毒H5亚型血凝素蛋白的重组表达质粒，是由以下方法构建而成：

(1)高致病性禽流感病毒H5亚型血凝素HA1，其序列为SEQ ID NO.1；乳酸脱氢酶LDH的启动子基因P，其序列为SEQ ID NO.4，其克隆过程如下：

设计启动子引物P1、P2：

P1 5’-TAAGGTACCTACTGAGAAGTTGCTC-3’

P2 5’-TAACTCGAGGCCGACGAGGATAACT-3’

5’端分别引入KpnI和XhoI限制性内切酶酶切位点，TAA为保护碱基，以质粒pRV85为模板，常规PCR克隆乳酸脱氢酶启动子P；

设计高致病性禽流感病毒血凝素HA1引物HAF1、HAR2：

HAF1 5’-TAACTCGAGAAAATGGAGAAAATAGTGCTTC-3’

HAR2 5’-TAAGATATCCTACAATCTGAACTCACAAATT-3’

5’端分别引入XhoI和EcoRV限制性内切酶酶切位点，TAA为保护碱基，以质粒pCI-H₅HA为模板，常规PCR克隆高致病性禽流感血凝素基因HA1；

(2)重组表达质粒pLEM415-PHA1的构建

利用酶切连接技术，分别将乳酸脱氢酶启动子P和高致病性禽流感血凝素HA1目的片段连接在大肠-乳酸杆菌穿梭质粒pLEM415上，得到重组表达质粒pLEM415-PHA1；采用限制性内切酶KpnI、XhoI、EcoRV，分别用双酶切验证。

2.用权利要求1所述重组表达质粒电转化获得的表达高致病性禽流感病毒H5亚型血凝素蛋白的重组嗜酸乳杆菌，该重组嗜酸乳杆菌4356菌株，属于嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)。