[发明专利]一种白术多糖及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种白术多糖的制备方法与其在调节肠道菌群平衡中的应用。

背景技术

人体消化道内经常有一层微生物或微生物层存在，它们对宿主不但无害，而且是有益和必需的，这一微生物层即称为正常微生物群(normal microbiota)或正常菌群(normal bacteria flora)。这些微生物群(数百亿，占人体重量的1/50-1/60)在人体肠道内进行活跃的生长代谢活动，有着极为重要的生理作用。与人体消化、吸收、免疫、抗肿瘤、抗衰老、抵抗外来菌群侵袭等方面密切相关。众多研究结果表明，年龄、人种、膳食结构、生活习惯、环境、疾病、抗生素治疗等会影响人肠道微生态系统及其群落结构。双歧杆菌和乳杆菌是两种最重要的肠道益生菌，其数量和组成对维持健康肠道环境和提高免疫系统功能起着关键作用。

双歧杆菌能维持宿主肠道的微生态平衡，提高人体对乳糖的耐受性；具有抑制肠道病原菌生长，改善蛋白质代谢并能合成多种维生素，促进机体免疫机能等。双歧杆菌在时空、种类和数量上产生相应的动态变化，随着年龄增长而减少，从而直接影响人体的健康。近年来，国内外出现了研究开发双歧杆菌产品的热潮，目前主要的产品有酸乳制品、胶囊等，但该类活菌制剂保存有效性较差及活菌摄入机体后受到胃酸影响的条件限制，使向机体补充双歧杆菌的效果降低。因而，向体内补充双歧生长因子，采用促进双歧杆菌增殖的物质来补充体内有益菌群将是一条更易被接受的途径。在双歧生长因子中，低聚糖类研究最多，如果糖低聚糖、大豆低聚糖、异麦芽寡糖等都具有促进双歧杆菌的增殖作用。

经查证，目前消费市场上的益生元产品主要有：英吉利益生元铁锌钙葡萄糖、多美滋婴幼儿奶粉、贝因美牛初乳益生元奶粉、多维益生元豆浆粉、亨氏清儿润、雀巢力多精等等，这些产品在治疗肠道菌群失调引起的腹泻、慢性腹泻、抗生素治疗无效的腹泻及便秘的等方面发挥了很大的作用，同时也是某些临床疾病的良好的辅助药物。它们大多为添加低聚果糖、低聚葡萄糖、低聚木糖、褐藻胶低聚糖、菊糖等各类功能性低聚糖的产品，以乳制品居多。

通过对国内外专利文献、期刊杂志及其它公开发表的文献(如互联网)进行检索，多糖研究主要集中在免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等，并未有多糖类化合物作为益生元开发利用。

白术(Rhizoma Atractylodis Macrocephalae)为菊科(Compositae)植物白术Atractylodes macrocephala Koidz的干燥根茎。白术为多年生草本，栽培历史悠久，主产中国浙江省东阳、磐安一带，是著名的道地中药材“浙八味”之一，分布于浙江、江西、湖南、湖北、陕西，亦多栽培。白术多糖，也仅限于在免疫调节及抗肿瘤、降血脂上有良好作用，没有对益生菌和肠道菌群作用的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种白术多糖的制备方法与其在调节肠道菌群平衡中的应用。

本发明提供的白术多糖的制备方法，包括下述步骤：

1)将白术用水浸泡，然后煎煮，收集滤液，浓缩得到白术浸提液；

2)在步骤1)获得的白术浸提液中加入乙醇或乙醇溶液，调节乙醇最终体积百分浓度为70％-75％(如71.25％)，置于4℃静置24小时，离心收集沉淀，将沉淀用水溶解，然后在水中透析去除去乙醇、小分子糖、蛋白质和盐；浓缩透析液，真空冷冻干燥，得到白术粗多糖；

3)将步骤2)获得的白术粗多糖用水溶解，添加2倍体积的Saveg液，混合摇匀，离心收集上清液，重复此步骤，直到上清液经紫外测定在260、280nm波长处无蛋白质和核酸的吸收峰，此上清液为脱蛋白后的糖液；然后在水中透析除去氯仿和正丁醇，浓缩透析液，真空冷冻干燥，得到不含蛋白质的白术多糖；所述Saveg液为氯仿和正丁醇按体积比为4∶1混合后的混合液；

所述方法中还包括将步骤3)获得的不含蛋白质的白术多糖用水溶解，进行DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子柱层析纯化，用50mM Tris-HCl收集含多糖的洗脱液；将洗脱液置于水中透析去除Tris-HCl组分浓缩后冷冻干燥，得到白术多糖。

为了加快溶解的速度，所述溶解用水的温度为40-80℃，如60℃。

所述步骤2)和步骤3)中，所述透析的截留分子量为5000Da以下，优选为3500Da。

所述步骤2)和步骤3)中，所述透析的时间为24-72小时，优选为48小时。