[发明专利]一种L-鸟氨酸-α-酮戊二酸盐的制备方法

权利要求书

1.一种L-鸟氨酸-α-酮戊二酸盐的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)固定化酶的制备

取三乙醇胺阴离子苯乙烯树脂，用碳酸钾溶液浸泡6-18h后过滤，再将滤出的三乙醇胺阴离子苯乙烯树脂与碳酸钾、溴化氢按重量比为1∶(0.1-0.6)∶(0.2-0.5)配制成溶液，于冰浴中反应5-60min，调节pH值至7-10，再加入精氨酸酶，使其与三乙醇胺阴离子苯乙烯树脂的重量比为(0.002-0.01)∶1，于1-10℃反应12-48h，洗涤后用饱和食盐水浸泡0.5-3h，再利用去离子水洗净至溶液中检测不出氯离子，即得固定化酶，保存于水中；

(2)转化条件的优化

将步骤(1)中制得的固定化酶与精氨酸、乙酸锰按重量比1∶(1-3)∶(0.004-0.02)混合，加入去离子水中，搅拌，采用乙酸调节pH值至9.0-9.4，在35-40℃下，反应15-18h得固定化酶混悬液；

(3)产物提取及精制

将步骤(2)中的固定化酶混悬液过滤后，向滤液中加α-酮戊二酸、活性炭，于20℃以下搅拌反应5-30min后，过滤，加入醇类，搅拌0.5-1h，析出L-鸟氨酸-α-酮戊二酸盐2∶1，搅拌3-5h，再经降温至20℃以下、离心、干燥即得产品。

2.根据权利要求1所述的一种L-鸟氨酸-α-酮戊二酸盐的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的溶液中含三乙醇胺阴离子苯乙烯树脂的重量百分浓度为40-60g/ml。

3.根据权利要求1所述的一种L-鸟氨酸-α-酮戊二酸盐的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的碳酸钾为摩尔浓度1-5M的溶液，所述的溴化氢为重量百分浓度1-4g/ml的溶液，所述的精氨酸酶为重量百分浓度1-4g/L的溶液。

4.根据权利要求1所述的一种L-鸟氨酸-α-酮戊二酸盐的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中调节pH采用摩尔浓度为0.05-2M的碳酸氢钠溶液。

5.根据权利要求1所述的一种L-鸟氨酸-α-酮戊二酸盐的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中洗涤过程是依次利用体积为100-400ml，浓度为0.05-0.3M的碳酸氢钠溶液、0.5-4M的氯化钠溶液及去离子水洗涤2-5次。

6.根据权利要求1所述的一种L-鸟氨酸-α-酮戊二酸盐的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中搅拌反应的搅拌速度为70-80rpm，反应终点利用高效液相(HPLC)控制。

7.根据权利要求1所述的一种L-鸟氨酸-α-酮戊二酸的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中加入α-酮戊二酸量为：[(精氨酸量×0.96)×133/174]-(调pH所用的乙酸量)，活性炭的加入量为2-5g/100ml滤液。

8.根据权利要求1所述的一种L-鸟氨酸-α-酮戊二酸盐的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中反应液L-鸟氨酸-α-酮戊二酸盐的重量百分数为30-33％。

9.根据权利要求1所述的一种L-鸟氨酸-α-酮戊二酸盐的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的醇类包括甲醇、乙醇或正丙醇。

10.根据权利要求1所述的一种L-鸟氨酸-α-酮戊二酸盐的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中加入醇类后的搅拌反应的温度为20℃以下。