[发明专利]泛醌类代谢中间产物的发酵生产方法

权利要求书

1.一种发酵生产泛醌类代谢中间产物的方法，其特征在于，

步骤一，利用同源重组技术，构建在目标必需基因两侧带有条件性重组酶识别位点和正负筛选标记、包含条件性重组酶质粒的基因工程菌株；

步骤二，培养上述基因工程菌株；

步骤三，加入终浓度为L-阿拉伯糖于步骤二的培养物中，诱导；

步骤四，收集步骤三的培养物，处理后进行反向HPLC检测，获得目标泛醌合成途径的中间产物——3-八异戊二烯-4-羟苯甲酸(HP₈B)。

2.根据权利要求1所述的发酵生产泛醌类代谢中间产物的方法，其特征是，步骤一中所述的菌株具体为：大肠杆菌菌株DYUBI，保藏编号为：CGMCC NO：3912。

3.根据权利要求1或者2所述的发酵生产泛醌类代谢中间产物的方法，其特征是，步骤一中所述的菌株为包含质粒pBFLP的大肠杆菌，生长培养基为LB培养基，生长与培养温度为32度。

4.根据权利要求1所述的发酵生产泛醌类代谢中间产物的方法，其特征是，步骤一中DYUBI菌株中所述的ubiD基因两侧带有正副筛选标记基因sacB和tet以及两个FRT位点。

5.根据权利要求1所述的发酵生产泛醌类代谢中间产物的方法，其特征是，步骤一中所述的条件性重组酶为受阿拉伯糖启动子(PBAD)调控的FLP重组酶。

6.根据权利要求1所述的发酵生产泛醌类代谢中间产物的方法，其特征是，步骤二中所述的培养具体为：菌株DYUBI，32度，培养至浓度为OD600＝1.0。

7.根据权利要求1所述的发酵生产泛醌类代谢中间产物的方法，其特征是，步骤三中所述的诱导具体为：32℃下，0.2％L-阿拉伯糖振荡摇床培养，时间为3小时。

8.根据权利要求1所述的发酵生产泛醌类代谢中间产物的方法，其特征是，步骤四中所述的反向HPLC检测，其检测波长为274nm，检测时间30分钟，检测柱Spherisorb octyldecyl silane2柱，流动相为正己烷/甲醇(1∶9)，流速为0.6ml/分钟。