[发明专利]一种临床快速检测鼻粘膜上生物膜化细菌的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物膜化细菌的检测方法，具体是一种临床快速检测鼻粘膜上生物膜化细菌的方法。

背景技术

生物膜化细菌的存在是大多数慢性炎症迁延难愈的主要原因，慢性鼻窦炎鼻粘膜上亦存在生物膜化细菌，这也可能是其难以治愈的原因。目前检测细菌生物膜的方法有扫描电镜和激光共聚焦免疫荧光(CLSM)法，也有试图检测细菌生物膜上的多糖从而确定生物膜化细菌的存在。扫描电镜和CLSM法能直接原位检测到组织表面上细菌生物膜的存在和形态，但价格昂贵，检测时间长，同时检测需要的仪器设备价值高达几百万人民币，无法在临床上广泛开展检测。而通过检测多糖确定细菌生物膜，存在很大争议，也无法在临床上开展。

有实验中运用奥利新蓝(alan blue)对多糖的粘附和染色作用，刚果红对细菌的染色，从而可以确定机体外细菌生物膜的存在。但由于不同学科检测人体部位不同，所取标本无法运用该方法检测，所以在临床上没有开展该检测方法。本发明运用该原理，同时根据鼻窦炎临床诊断治疗的特点，深入研究后建立一套完整的操作流程，可以在鼻科临床广泛开展。目前对生物膜化细菌的检测价格昂贵，检测时间长，所需设备为大型贵重仪器，无法在临床上广泛应用。本发明操作简单，时间很短，所需主要设备为一普通显微镜，费用低廉。适合在临床推广。

发明内容

本发明的目的在提供一种临床快速检测鼻粘膜上生物膜化细菌的方法，以解决背景技术中的不足。

一种临床快速检测鼻粘膜上生物膜化细菌的方法，该方法的具体步骤为：

(1)试剂配制

阿力新蓝0.4～0.6g加冰醋酸0.70～0.80ml用三蒸水配至20～30ml，充分溶解备用，刚果红0.8～1.2g加三蒸水配至50ml充分溶解备用；

(2)检测步骤：①鼻内窥镜下取目标鼻粘膜0.3cm×0.3cm大小标本后，生理盐水轻轻洗去血液②鼻粘膜组织置于2ml EP管中，管内加入0.5-1.5mL生理盐水，震荡5～10分钟③取悬液滴于玻片上加阿力新蓝混匀，静置3～5min后，火焰加热固定，至染液完全挥发④加入刚果红均匀涂布覆盖，火焰加热至干燥后，三蒸水冲洗，吸干水后油镜下观察，生理盐水阴性对照。

(3)判断标准

红色为细菌生物膜，黄色为普通细菌，背景为淡蓝色，深红色为细菌生物膜型细菌。

有益效果：

本发明中的方法检测结果与扫描电镜结果对照，100％结果一致，该方法操作简单，费用低廉，非常方便在鼻科临床推广。

具体实施方式：

以下结合实施例对本发明所涉及纳米焦磷酸氧钛新型光催化材料的制备及其光催化降解应用作进一步说明。

(1)试剂配制

阿力新蓝0.5g加冰醋酸0.75ml用三蒸水配至25ml，充分溶解备用，刚果红1.0g加三蒸水配至50ml充分溶解备用；

(2)检测步骤：①鼻内窥镜下取目标鼻粘膜0.3cm×0.3cm大小标本后，生理盐水轻轻洗去血液②鼻粘膜组织置于2ml EP管中，管内加入1.0mL生理盐水，震荡8分钟③取悬液滴于玻片上加阿力新蓝混匀，静置5min后，火焰加热固定，至染液完全挥发④加入刚果红均匀涂布覆盖，火焰加热至干燥后，三蒸水冲洗，吸干水后油镜下观察，生理盐水阴性对照。

(3)判断标准

红色为细菌生物膜，黄色为普通细菌，背景为淡蓝色，深红色为细菌生物膜型细菌。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。