[发明专利]具有特殊生物活性的花色苷提取和测定方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种提取蓝靛果中花色苷及其测定的方法，具体涉及一种具有特殊生物活性的花色苷提取测定方法。

背景技术：

自由基对人体的损伤是造成人衰老的重要原因之一，其损害作用主要体现在对生命大分子的损害。

羟基自由基是高反应性自由基，反应距离短，速度快，攻击力强，几乎能与细胞中任何分子发生反应。它可介导脂质氧化，蛋白质解聚、聚合，核酸断裂和多糖裂解等生化反应，引发组织细胞病变，导致各种疾病发生和加速机体衰老，是已知的最活泼的活性氧自由基。它几乎和所有的细胞成分发生反应，对机体危害极大，与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬有关。

发明内容：

本发明的目的是提供一种能够以蓝靛果为原料，采用溶剂提取法，得到提取液，旋转蒸发，经大孔树脂纯化，减压浓缩，真空干燥，得到成品。

上述的目的通过以下的技术方案实现：

具有特殊生物活性的花色苷提取方法，先将蓝靛果鲜果除杂并洗净晾干水分，送入冷室进行冷冻并研磨进行粉碎，再按蓝靛果的重量份数∶酸化乙醇的重量份数＝1∶15的比例加入酸化乙醇，所述的酸化乙醇pH值为2，在提取温度为50～60℃下提取90分钟然后过滤最后收集滤液，再过滤提取2～3次；得到提取液，将提取液合并减压蒸发除去溶剂，用大孔树脂AB-8纯化，旋转蒸发，真空冻干。

所述的具有特殊生物活性的花色苷提取方法，每个提取条件的确定，均以羟自由基清除率和1，1-二苯基-2-三硝基苯DPPH清除率为指标，通过选择对羟自由基OH和1，1-二苯基-2-三硝基苯DPPH两者的清除率都较高的因素为最佳，以获得较好的抗氧化活性。

所述的具有特殊生物活性的花色苷提取方法：

(1).所述的蓝靛果花色苷的提取工艺流程为蓝靛果→除杂→洗净、沥干→冻藏→冻样研磨→加浸提液提取→抽滤→滤液→减压蒸发浓缩→大孔树脂→旋转蒸发→真空冻干→产品；

(2).蓝靛果花色苷的提取

准确称取10g蓝靛果冻果，用高速万能粉碎机粉碎后置于锥形瓶中，加入提取液并密封，放入恒温水浴锅中；选取料液比、提取剂浓度、温度和时间为影响因素进行L₉(3⁴)正交试验确定最佳提取工艺，以花色苷提取量和抗氧化能力为考核指标，70％乙醇作为提取溶剂，料液比为1g∶15ml、提取温度为50℃、提取时间为90min、PH值为2、提取3次。

一种所述的具有特殊生物活性的花色苷含量的测定方法：

滤液用柠檬酸磷酸氢二钠Na₂HPO₄缓冲液定容后，以缓冲液作空白对照，进行光谱扫描，确定最大吸收峰后，在此波长下进行提取液吸光度测定，通过色价法计算；

(1).羟自由基清除率的测定

在试管中分别加入1mL 10mmol/L水杨酸-乙醇溶液、样液、1mL 10mmol/L硫酸亚铁FeSO₄溶液、最后加入2mL 10mmol/L过氧化氢H₂O₂启动锌基(Fenton)，摇匀后于510nm处测定吸光度A_X；用蒸馏水代替样液，测得的吸光度值为A₀；取2mL蒸馏水代替过氧化氢H₂O₂，测得的吸光度为A_X0；实验进行三次平行试验；羟自由基清除率I(％)表示为：

I(％)＝[A₀-(A_X-A_X0)]/A₀×100％；

(2).1，1-二苯基-2-三硝基苯DPPH自由基清除率的测定

准确移取样液与3mL 60μmol/L的1，1-二苯基-2-三硝基苯DPPH(二苯基苦基苯肼；1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)溶液(用无水乙醇准确配制)均匀混合，反应30min后在517nm处测定其吸光度A_i，同时用相同的方法测定等体积无水乙醇与3mL 60μmol/L的1，1-二苯基-2-三硝基苯DPPH溶液混合后的吸光度A₀，以及样品溶液与3mL无水乙醇混合液的吸光度A_j，实验进行三次平行试验，通过下列公式计算1，1-二苯基-2-三硝基苯DPPH清除率R(％)：

R(％)＝[A₀-(A_i-A_j)]/A₀×100％。

本发明的有益效果：