[发明专利]黄腊果皂苷类成分及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种药物原料的提取制备方法及其应用，具体涉及黄腊果皂苷类成分的制备方法及其应用。

背景技术

黄腊果(Stauntonia brachyanthera Hand-Mazz)为木通科野木瓜属植物，在我国贵州、广西等省(区)有分布，为常绿木质藤本，其茎在民间主要作木通药用，具有清热利尿、通经活络、镇痛排脓、通乳等功效，与木通功效相同；果实形态与预知子基本相同，不同点在于预知子成熟后开裂，故又名八月扎、羊开口，黄腊果成熟后不开裂，色黄，民间也把其当作预知子药用；果皮含有众多石细胞，民间用于结石。叶在民间亦入药，用于外感风寒，头痛胸闷，吐泻腹胀，黄腊果整个植物都具有一定的药用价值。(谢宗万、余友芩.全国中草药名鉴(上册)[M].北京：人民卫生出版社，1996：176.)

有关黄腊果的开发与利用近年来越来越受到人们的重视。因为它不仅具有很好的药用价值，而且其果实也是一种有高营养价值的美味水果。目前以有报道将其果实开发成黄腊果醋，其茎作为木通入药(汪冶，陈超，梅树模。侗药猪腰子(黄腊果)藤茎的生药学鉴定。)但迄今为止，其在化学研究领域仍是一片空白，本专利将是首次对该植物进行化学成分分离，分析和研究。

发明内容

本发明的目的是提供一系列以齐墩果烷型、降甲基齐墩果烷型和羽扇豆烷型为母核的三萜苷元及其糖苷类化合物，其母核结构如下：

本发明的另一个目的在于应用简便、安全、价廉和实用的方法制备黄腊果皂苷类成分，并说明其应用，该方法能制备纯度较高的一系列以齐墩果烷型和降甲基齐墩果烷型为母核的三萜类化合物。

本发明目的的实现方式如下：

(1)黄腊果原料粗粉1千克，用12倍，10倍和8倍的20％～95％的乙醇溶液80℃下温浸提取三次(第一次3小时，第二次2小时，第三次2小时)或超声提取，过滤，合并滤液，浓缩至1升总提取液。

(2)将总提取液采用下述a)或b)方法之一对有效部位进行富集：

a将上述总提取液按大孔吸附树脂∶药材为1∶1的比例上已处理好的非极性或弱极性大孔吸附树脂柱层析分离，采用梯度洗脱法，依次用水、40％、70％、90％的含水乙醇或甲醇洗脱，每个梯度洗脱4～10个柱床体积，合并洗脱液，过滤，浓缩至1升，得黄腊果乙醇洗脱液。

b.将上述总提取液按药材∶正丁醇为1∶1的比例，用0.5-3倍体积的水饱和正丁醇萃取3-8次，合并正丁醇，得黄腊果正丁醇萃取液。

(3)将上述乙醇洗脱液或正丁醇萃取液经氧化镁脱色，按每升80克加入氧化镁回流脱色1小时，过滤，滤液经减压浓缩、真空干燥得黄腊果总皂苷。

(4)将上述黄腊果总皂苷经正相硅胶柱色谱法、反相柱色谱法、制备高效液相色谱法中的一种方法或多种方法联合使用，可除去杂质，纯化，得到所需的三萜类单体化合物及其纯度更高的总皂苷混合物。一般以不同比列的氯仿-甲醇或丙酮-甲醇作为洗脱剂洗脱，可得到部分三萜单体及三萜混合物，如将黄腊果总皂苷提取液经正丁醇萃取、氧化镁脱色后，用硅胶柱色谱法以二氯甲烷和甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，在二氯甲烷∶甲醇＝100∶5得到一新天然产物3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-3-O去甲齐墩果-12 20(29)-二稀-28-羧酸，在二氯甲烷∶甲醇＝100∶8得到一单体化合物胡萝卜苷。

(5)将从黄腊果中分离得到的皂苷类单体或混合物单独或与其它药物组合作为原料药应用于抗肿瘤、抗炎、利尿和相关疾病治疗的药剂中。

上述浓缩操作可采用常规浓缩和减压浓缩，干燥可采用50℃下常规干燥、真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。

步骤(2)中的大孔吸附树脂选用非极性树脂(XAD-4，Diaion HP-20，D101、D102、D401，D1、D2、D3、D4，HPD-100，X-5)、弱极性树脂(D-201，HPD-300，AB-8)和中等极性(XAD-6、XAD-7、XAD-8等)的吸附树脂。

步骤(4)中正相硅胶色谱柱所使用的流动相可以是氯仿或二氯甲烷和甲醇，采用氯仿或二氯甲烷∶甲醇＝50∶1～1∶1的比例梯度洗脱；反相色谱柱的填料可为RP-18，RP-8或RP-2.；所述的高效液相制备方法所使用的流动相为5％～95％的含水甲醇；高效液相色谱柱的填料为八烷基硅烷键合硅胶或十八烷基硅烷键合硅胶。

本方法为首次对黄腊果植物中的化学成分进行分离、纯化和医药用途等方面的研究，应用本方法得到的黄腊果总皂苷提取物的收率为23％以上，总皂苷的含量大于35％，含量测定方法可采用香草醛-硫酸法。