[发明专利]一种基因工程囊素样肽及其表达基因与应用

权利要求书

1.一种基因工程囊素样肽，具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列。

2.一种编码权利要求1所述基因工程囊素样肽的基因片段，具有如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。

3.一种含有SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的表达载体。

4.权利要求2所述的基因工程囊素样肽的基因片段在制备囊素三肽中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤如下：

(1)将基因工程囊素样肽的基因片段插入表达质粒，得到重组质粒；

(2)将步骤(1)制得的重组质粒转化宿主菌，构建宿主菌表达体系；

(3)利用步骤(2)构建的宿主菌表达体系诱导表达囊素样肽，并经过后处理工艺制得囊素三肽。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤(1)中所述将基因工程囊素样肽的基因片段插入表达质粒，是指用核酸限制性内切酶EcoR I及SalI、Xho I或HindIII之一双酶切基因工程囊素样肽的基因片段，连接到相同酶切的表达质粒上，然后进行测序验证。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述表达质粒为：pET-32a、pET-32b或pET-32c。

8.如权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤(2)中所述宿主菌为：大肠杆菌BL21(DE3)。

9.如权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤(3)中后处理工艺的步骤如下：

将表达后的囊素样肽菌液经离心后，收集菌体沉淀，用0℃冰冷的高渗透溶液悬浮菌体沉淀，混合均匀，冰浴8～10min；然后，离心收集菌体沉淀，用等体积0℃冰冷的低渗透溶液悬浮菌体沉淀，混合均匀，冰浴8～10min；然后，离心取上清液，过0.2～0.24um混合纤维素膜，得到囊素三肽。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述高渗透溶液：pH＝8.5，终浓度Tris-HCl20～30mmol/L、EDTA 2～3mmol/L、蔗糖25wt％；所述的低渗透溶液为：pH＝8.5，终浓度Tris-HCl 20～30mmol/L、EDTA 2～3mmol/L。