[发明专利]一种腈转化酶的高通量筛选方法

权利要求书

1.一种腈转化酶的高通量筛选方法，所述腈转化酶为腈水合酶、酰胺酶或腈水解酶，所述方法包括：取待测样品溶于蒸馏水中，加入底物氨基腈类化合物或羟基腈类化合物或酰胺类化合物、至底物浓度为1～100mM，于10～50℃水浴转化反应10～120min，取转化液，先后添加Fe²⁺和Fe³⁺离子水溶液，进行显色反应，添加两种离子的时间间隔为0～10min，所加入的底物、Fe²⁺、Fe³⁺物质的量之比为1∶1～3∶1～3；

所述氨基腈类化合物为下列之一：2-氨基-2，3-二甲基丁腈、2-氨基丁腈、2-氨基丙腈、β-氨基丙腈、3-氨基丁腈；

所述羟基腈类化合物为下列之一：2-羟基丙腈、扁桃腈；

所述酰胺类化合物为下列之一：2-氨基-2，3-二甲基丁酰胺、2-氨基丁酰胺；

添加底物为氨基腈类化合物或羟基类腈化合物时，若转化液先由无色变为浅绿色再变为黄色则表明被测样品含有腈水合酶，若转化液不发生明显的颜色变化、最终显示黄色则表明被测样品含有腈水解酶或同时含有腈水合酶和酰胺酶，若转化液先由无色变为浅黄色再变为蓝色则表明被测样品不含腈转化酶；

添加底物为酰胺类化合物时，若转化液不发生明显的颜色变化，最终显示黄色则表明被测样品含有酰胺酶，若转化液先由无色变为浅绿色再变为黄色则表明被测样品不含酰胺酶。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的Fe²⁺离子水溶液为FeSO₄或FeCl₂水溶液，浓度为0.01～1.0M；所述的Fe³⁺离子水溶液为Fe(NO₃)₃或FeCl₃水溶液，浓度为0.01～1.0M。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述显色反应温度为20～40℃，显色反应时间为1～5min。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述待测样品为微生物菌种的菌悬液，加入底物进行转化反应后，转化液经离心，取上清液再进行显色反应。