[发明专利]汉城链霉素及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及从海洋放线菌(Streptomyces seoulensis)液体发酵物中提取的汉城链霉素(streptoseomycin)及其制备方法与应用。

背景技术

虽然微生物的次生代谢产物已被广泛研究，但一些特境微生物的代谢产物还是没有引起人们足够重视。海洋环境的特殊性造就了海洋放线菌独特的代谢方式和代谢产物。近年来人们不断从各种海洋环境的放线菌中寻找到能产生具有新型作用机制的抗生素。除了抗生素以外，海洋放线菌还能够产生多种酶的抑制剂，海洋放线菌的多样性为次生代谢产物提供了一个丰富的来源。

随着抗生素的广泛使用，致病菌耐药性急剧增加，原有的抗生素疗效已经大幅度降低，新的疾病不断出现，这些都给抗生素发展带来了巨大的挑战，发现新菌种以寻找新型抗生素成为迫切的需要。海洋放线菌可能是筛选抗生素的一条重要途径。然而，到目前为止，尚未见从汉城链霉菌(Streptomyces seoulensis)分离抗生素的报道。

发明内容

本发明需要解决的问题是：

1.提供具有抗菌活性的汉城链霉素(streptoseomycin)。

2.提供一种提取、分离汉城链霉素(streptoseomycin)的方法。

3.提供汉城链霉素(streptoseomycin)在制备抗生素药物中的应用。

本发明通过下述技术方案予以实现。

本发明所述汉城链霉素(streptoseomycin)，从海洋放线菌液体发酵提取物中分离得到，其结构式为：

Streptoseomycin

单晶结构图见说明书附图1。

汉城链霉素(Streptoseomycin)的制备方法，包括下述步骤：

1.将新鲜的从对虾(Penaeus chinensis)肠道中分离、纯化得到的汉城链霉菌菌体块接种到高氏I号培养基(可溶性淀粉20g，KNO₃1g，NaCl 0.5g，K₂HPO₄·3H₂O 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，FeSO₄·7H₂O 0.01g，1L蒸馏水)中，于摇床上，在150rpm、28℃条件下培养5天作为种子液；

2.然后将种子液接种于马丁培养基中，在150rpm、20-30℃条件下发酵10天；

3.将步骤2所得发酵液经纱布过滤，滤液用乙酸乙酯萃取，真空浓缩干燥得黑色粗浸膏F1；

4.将粗浸膏F1悬浮于水，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯萃取液经浓缩得浸膏F2；

5.对浸膏F2进行硅胶柱层析，依次用4倍体积的氯仿，氯仿∶甲醇＝100∶1，氯仿∶甲醇＝100∶2，氯仿∶甲醇＝100∶4，进行洗脱，浓缩100∶4(氯仿∶甲醇)段得到黑色浸膏F3；

6.然后对浸膏F3进行Sephadex LH-20分离(洗脱液氯仿∶甲醇＝1∶1)合并绿色荧光部分洗脱液得淡黄色浸膏F4；

7.对浸膏F4，用反相柱ODS进行分离，先用55％甲醇进行洗脱除去环二肽，然后用65％甲醇洗脱，合并绿色荧光部分洗脱液得淡黄色固体F5；

8.对浸膏F5，用高压液相色谱法(色谱柱：Allsphere ODS-2.5mm(250R4.6mm)column；流动相：甲醇/水＝60/40(v/v)流速：2.0mL/min)分离得到汉城链霉素streptoseomycin(保留时间t_R＝38.2min)。

本发明的汉城链霉素(streptoseomycin)对厌氧菌具有很强的抑制作用，且不具有细胞毒性，因此汉城链霉素(streptoseomycin)可作为一种新颖的抗生素，并在制备抗生素中得到应用；同时该化合物具有很强的绿色荧光，有望深入研究这类抗生素的作用机制。

与现有技术相比，本发明具有下述突出优点：

1.本发明的汉城链霉素(streptoseomycin)是结构新颖的化合物，可制备成新型抗生素或先导化合物。克服现有抗生素耐药性的缺点。

2.本发明的汉城链霉素(streptoseomycin)可以利用微生物进行液体发酵生产，工艺简便，周期短，成本低，来源有保证。

附图说明

图1为汉城链霉素(streptoseomycin)的单晶结构图。

具体实施方式