[发明专利]一种FMR1基因5’端非编码区CGG重复数目的PCR检测方法

说明书

发明所属领域： 

本发明涉及对X染色体FMR1基因异常所导致的几种遗传疾病的实验室辅助诊断方法。该方法的建立旨在以分子生物学检测方法作为临床检查的辅助手段，提高临床诊断的正确率，并为相关遗传病的产前筛查提供一种新的检测手段。 

发明背景： 

脆性X综合征，脆性X相关共济失调综合症和脆性X相关卵巢功能不足 

脆性X综合征(fragile x syndrome，FXS)也被称作脆性X染色体综合征或Martin-Bell综合征，被首次报到于与20世纪60年代末，是一种X连锁不完全显性遗传病。患者从儿童期或少年期开始出现智力发育异常症状和一系列异常外貌体征。其主要症状为1.智力低下，计算能力差，无数字的基本概念。抽象思维及推理能力方面均有明显缺陷。2.语言障碍，表现为会话和言语表达能力的发育严重迟缓，学语年龄延迟、词汇量少、语言重复单调。3.行为障碍，表现为多动、注意力不集中。孤独症也较常见。4.特殊面容：包括头围增大、脸长、前额突出、虹膜颜色变淡、耳轮大、腭弓高、嘴大唇厚及下顷大而突出等。 

FXS的病因为X性染色体异常，具体地说是位于X染色体上的FMR1基因5’端非编码区CGG重复序列的异常延长。已知正常人在此区段的CGG重复数目约为5-55个，临床病人则多于200个(称为‘全突变型’)。此区段CGG重复数目在55-200个之间则被称作‘前突 变’。男性只有一条X染色体，一旦发生异常则临床症状表现明显。女性有两条X染色体，当其中一条异常，另一条正常时可表现较轻的临床症状。两条都异常时则症状严重，但这种情况几率较低。因此，FXS的临床发病率在男性中较在女性中为高。在男性中大约为人群的1200到2500分之一。在女性中大约为人群的1650到5000分之一。FXS约占男性智力低下患者的4％到8％，是发病率仅次于唐氏综合征(Downsyndrome)的又一大类导致智力发育低下的遗传病. 

近年研究发现，具有X染色体FMR1基因‘前突变’的个体在年轻时虽可不表现任何临床症状。但有部分‘前突变’携带者在老年期会发生类帕金森样的震颤麻痹和共济失调。其主要症状为：1.意向性震颤，即在注意力集中，伸手拿取物体或倒水时出现不可控的震颤。2.四肢肢端麻木。3.情绪不稳定，焦虑，易激惹，性格改变。4.短期记忆丧失，智力衰退。上述症状将进行性发展，最终在发病后5-20年危及生命。这些症状虽与帕金森氏症相似，但其发病机制与干预、治疗手段均有不同之处，故这部分病人应与帕金森氏症相区分而诊断为‘脆性X相关共济失调综合症’(Fragile X-associated Tremor/Ataxia Syndrome，FXTAS)。由于对本病缺乏认识及缺乏简便明确的实验室检查手段，这类病人目前在临床上几乎都被诊断为类帕金森氏症、阿尔茨海默氏病或老年痴呆而延误治疗。与FXS类似，FXTAS患者男性较女性为多且发病率随年龄增长而升高，在50岁以上男性FMR1基因‘前突变’携带者中FXTAS发病率为30％，70岁以上则达50％，80岁以上可达75％。据估算，在男性中约有1/500到1/800是‘前突变’携带者，可见FXTAS在老年中枢神经系统退化性疾病中占重要位置。 

与男性不同，FMR1基因‘前突变’女性携带者则可能受到另一种疾病的困扰，脆性X相关卵巢功能不足(Fragile X-Associated PrimaryOvarian Insufficiency，FXPOI)。其主要症状为不孕和绝经期提前(早于40岁)。流行病学调查显示约20-28％的FMR1基因‘前突变’女性携带者会出现受孕困难。另有约23％的女性携带者会出现绝经期提前。据估算，女性中‘前突变’携带者可达1/130到1/250。可见FXPOI在原发性卵巢功能不足(Primary Ovarian Insufficiency，POI)患者中占有显著比重。鉴于POI可有多种发病机制，相应的治疗手段也各不相同。明确的病因学诊断将对治疗效果发生决定性的影响。 

FXS，FXTAS和FXPOI的诊断与FMR1基因5’端非编码区CGG重复数目的检测