[发明专利]α-葡聚糖酶以及含有其的口腔护理组合物

说明书

优先权

本申请要求2008年4月11日提交的美国临时专利申请序列号No.61/044,316的优先权，其以其整体引入作为参考。

背景技术

齿斑的形成导致龋齿、牙龈炎症、牙周病以及最终导致牙齿损失。齿斑是细菌、上皮细胞、白细胞、巨噬细胞及其他口腔分泌液的混合物。细菌产生高度分枝的多糖(highly branched polysaccharides)，其与来自口腔的微生物一起形成齿斑继续增殖的粘性基质。

随着齿斑继续积累，出现石头一样硬的白色或浅黄色沉积物。这些沉积物称为钙斑、牙石或牙垢，其在唾液中由菌斑(plaque)和矿物例如钙形成。

对预防和/或减少齿斑以及相关牙齿损坏的新方法有着持续的需要。

发明内容

一方面，提供了分离的α-葡聚糖酶，包含下述氨基酸序列，即(a)与天然Hypocea tawa的α-葡聚糖酶(SEQ ID NO：1的38-635位氨基酸残基)有至少99％同一性；或者(b)与Trichoderma konilangbra的α-葡聚糖酶(SEQ ID NO：3的38-627位氨基酸残基)有至少85％同一性。

另一个方面中，提供了编码本发明α-葡聚糖酶的分离多核苷酸以及含有该分离多核苷酸的重组核酸。还提供了含有该重组核酸的载体和宿主细胞。

在另一个方面中，提供了细胞培养物。在一些实施方式中，该细胞培养物含有生长培养基和上述宿主细胞的群体。细胞培养物可用于提供在适于分离的α-葡聚糖酶产生的条件下维持细胞培养物以产生本发明的α-葡聚糖酶。如果α-葡聚糖酶是分泌的，这可从生长培养基中收获。

在另一个方面中，提供了产生蛋白质的方法，其包括在适于分离的α-葡聚糖酶产生的条件下维持如上细胞的培养物。在一些实施方式中，该方法还包括从生长培养基中收获α-葡聚糖酶。

另一个方面中，提供了方法，其包括接受选自以下的分离的α-葡聚糖酶：(a)具有与成熟Hypocea tawa的α-葡聚糖酶(SEQ ID NO：1的38-635位氨基酸残基)有至少99％同一性的氨基酸序列的α-葡聚糖酶；(b)具有与成熟里氏木霉(Trichoderma reesei)的α-葡聚糖酶(SEQ ID NO：2的38-622位氨基酸残基)有至少85％同一性的氨基酸序列的α-葡聚糖酶；或者(c)具有与成熟Trichoderma konilangbra的α-葡聚糖酶(SEQ ID NO：3的38-627位氨基酸残基)有至少85％同一性的氨基酸序列的α-葡聚糖酶；以及将该分离的α-葡聚糖酶与口腔可接受的赋形剂混合，以制备口腔护理组合物。在一些实施方式中，α-葡聚糖酶不同于里氏木霉的α-葡聚糖酶(SEQ ID NO：2的38-622位氨基酸残基)。在一些实施方式中，该方法还包括包装该口腔护理组合物。

在另一个方面中，提供口腔护理组合物，其包含(a)口腔可接受的赋形剂；和(b)分离的α-葡聚糖酶。

在一个相关方面中，提供了口腔护理组合物，其包含：口腔可接受赋形剂和选自下列的分离的α-葡聚糖酶：(a)具有与成熟Hypocea tawa的α-葡聚糖酶(SEQ ID NO：1的38-635位氨基酸残基)有至少99％同一性的氨基酸序列的α-葡聚糖酶；(b)具有与成熟里氏木霉的α-葡聚糖酶(SEQID NO：2的38-622位氨基酸残基)有至少85％同一性的氨基酸序列的α-葡聚糖酶；或者(c)具有与成熟Trichoderma konilangbra的α-葡聚糖酶(SEQ ID NO：3的38-627位氨基酸残基)有至少85％同一性的氨基酸序列的α-葡聚糖酶。在一些实施方式中，该α-葡聚糖酶不同于里氏木霉的α-葡聚糖酶(SEQ ID NO：2的38-622位氨基酸残基)。

在一些实施方式中，α-葡聚糖酶以组合物重量的0.0001％至5％的浓度存在于该组合物中。

在一些实施方式中，该口腔护理组合物还包含第二种酶。在特定实施方案中，该第二种酶是脱氨酶、酯酶、糖苷酶、脂肪酶、氧化酶、过氧化物酶、蛋白酶、脲酶或纤维素酶。

在一些实施方式中，该组合物配制成牙膏，尽管预见了其他的口腔护理制剂。在一些实施方式中，该组合物例如包含增稠剂、表面活性剂、湿润剂和研磨剂中的至少一种。

在另一个方面中，提供了方法，其中接受分离的α-葡聚糖酶，然后提供与口腔可接受的赋形剂混合以制备口腔护理组合物。该口腔护理组合物可以包装。