[发明专利]一种检测螺旋霉素的方法及其专用酶联免疫试剂盒

权利要求书

1.一种检测螺旋霉素的酶联免疫试剂盒，包括螺旋霉素特异性抗体及包被原和酶标记物；所述包被原为螺旋霉素半抗原与载体蛋白的偶联物或抗抗体；所述酶标记物为酶标抗抗体或酶标螺旋霉素半抗原；当所述包被原为螺旋霉素半抗原与载体蛋白的偶联物时，所述酶标记物为酶标抗抗体；当所述包被原为抗抗体时，所述酶标记物为酶标螺旋霉素半抗原；所述螺旋霉素特异性抗体为螺旋霉素的单克隆抗体或螺旋霉素的多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：浓缩洗涤液可为pH值为6.2-6.7、含有0.7-1.0％的吐温-20、0.03-0.05‰的叠氮化钠、0.15-0.2mol/L枸橼酸盐缓冲液；所述浓缩复溶液可为含有5-8％的山羊血清、pH值为7.1-7.6、0.3mol/L的巴比妥-氯化钠缓冲液；所述百分含量为重量体积百分含量；所述显色液由显色液A液和显色液B液组成，显色液A液为过氧化氢或过氧化脲，显色液B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺；所述终止液为1～2mol/L硫酸或盐酸溶液。

3.根据权利要求2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为pH值为6.5、含有0.8％的吐温-20、0.05‰的叠氮化钠、0.2mol/L枸橼酸盐缓冲液；所述浓缩复溶液为含有6％的山羊血清、pH值为7.5、0.3mol/L的巴比妥-氯化钠缓冲液；所述百分含量为重量体积百分含量；所述显色液由显色液A液和显色液B液组成，显色液A液为过氧化脲，显色液B液为四甲基联苯胺；所述终止液为2mol/L盐酸溶液。

4.根据权利要求1或2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述螺旋霉素半抗原是将螺旋霉素与盐酸羟胺反应后得到的产物再与琥珀酸酐反应得到的。

5.根据权利要求1、2或3所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述螺旋霉素特异性抗体是用所述螺旋霉素半抗原与载体蛋白的偶联物作为免疫原得到的；所述载体蛋白为甲状腺蛋白、牛血清蛋白、鼠血清蛋白、人血清蛋白、兔血清蛋白、血蓝蛋白、纤维蛋白原或卵清蛋白等。

6.根据权利要求1或2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述螺旋霉素特异性抗体为螺旋霉素单克隆抗体；所述螺旋霉素单克隆抗体为由保藏号为CGMCC No.3355的对螺旋霉素药物的单克隆抗体杂交瘤细胞株D-1-2分泌的抗体。

7.根据权利要求1或2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述酶标抗抗体是采用过碘酸钠法将所述标记酶与所述抗抗体进行偶联得到的；所述过碘酸钠方法中，所述标记酶与所述抗抗体的摩尔浓度比为2∶1；所述标记酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶，优选为辣根过氧化物酶。

8.一种检测螺旋霉素的方法，包括以下步骤：

1)样品前处理：

动物肝脏组织、饲料样品的前处理方法：每1.0g匀浆物中，加入5ml提取液，振荡10min，置37℃恒温箱中反应30min，取出后振荡30s，3000g以上离心10min，配合饲料、鸡/猪肝：取100μl到700μl复溶液中混匀用于测定(稀释40倍)；浓缩/预混料：取50μl到750μl复溶液中混匀用于测定(稀释80倍)；取样进行分析。

动物肌肉组织样品前处理方法：每1.0动物组织匀浆物中，加入5ml提取液，振荡10min，置37℃恒温箱中反应30min，3000g以上离心10min；鸡肉/猪肉：取100μl到700μl复溶液中混匀用于测定(稀释40倍)；取样进行分析。

2)利用权利要求1-7中任一所述的酶联免疫试剂盒检测1)中所述样品。

9.由保藏号为CGMCC No.3355的对螺旋霉素药物的单克隆抗体杂交瘤细胞株D-1-2分泌的螺旋霉素单克隆抗体。

10.保藏号为CGMCC No.3355的对螺旋霉素药物的单克隆抗体杂交瘤细胞株D-1-2。