[发明专利]混合石蜡、PCR反应试剂的保存方法以及反应试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种采用混合石蜡对PCR反应试剂进行保存的方法以及含有 该混合石蜡的PCR反应试剂盒。

背景技术

实时荧光定量PCR(Real Time Polymerase Chain Reaction，Real Time PCR 实时PCR)技术是通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测， 从而实现对起始模板定量或定性分析的方法。目前在基础科学研究、临床诊断、 疾病研究及药物研发等领域都有广泛应用。其基本原理为：在PCR反应体系中 引入一种荧光化学物质，随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断积累，荧光 信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光信号强度，这样就可 以通过荧光强度变化监测产物量的变化，得到一条荧光扩增曲线图，在曲线指 数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，可进行定 量分析。但是在一般的PCR试剂盒中(反应液体积一般为10μl～100μl)，由于 反应液体积较少，在高温条件或长途运输过程中，又易因蒸发而体积减少，造 成反应液体积和成分的变化，从而影响检测结果；并且长时间保存后，反应液 中的Taq酶(耐热性多聚酶)、UNG酶(尿嘧啶DNA糖基酶)易失活也影响扩 增效率。

如果能采用一种方法，能保证少量的反应液体积在高温或运输的条件下不 发生体积和成分的变化，并且能长时间的保持Taq酶的活性，这将给PCR试剂 盒的使用带来更大的方便。为解决上述问题，目前有两种方法，一种是使用植 物油作为热启动PCR反应中的蒸汽障碍，以减少溶剂挥发，但这种方法并不能 解决长时间保持Taq酶活性的问题，另一种是采用固体石蜡将PCR反应中的酶 与其他成分隔离，创造了更多的实用和有效的热启动PCR方法，但现有固体 石蜡熔点太高，约为50～70℃，而且在-20℃的条件下，PCR反应试剂只能保存 1～2周。另外，若PCR反应体系中还含有UNG酶，UNG酶适合的作用温度为 37～50℃，现有固体石蜡熔点太高，若要熔化，需要加热到50℃以上，影响了 UNG酶在PCR反应液中发挥防污染的作用，从而可能会影响实验结果。

发明内容

本发明实施例的第一目的在于提供一种利用上述混合石蜡进行PCR反应 试剂的保存方法。

本发明实施例的第二目的在于提供一种含有上述混合石蜡的PCR反应试 剂盒。

本发明实施例的PCR反应试剂的保存方法，PCR反应试剂中含有酶和其它 必要成份，该方法为利用上述混合石蜡将PCR反应试剂中的酶与其他成份隔 离，该混合石蜡由液体石蜡(Liquid Paraffin)和熔化后的固体石蜡 (Paraffin wax)均匀混合而成，其中，固体石蜡选自熔点高于50℃的固体石蜡， 固体石蜡和液体石蜡的比值为1∶4～1∶12(w/v)。

本发明实施例的PCR反应试剂盒，包括反应容器及置于反应容器中的反 应液，所述反应液包括酶和其它必要成份，该PCR反应试剂盒中还包括用于将 反应液中酶和其它成份隔离的混合石蜡，该混合石蜡由液体石蜡(Liquid  Paraffin)和熔化后的固体石蜡(Paraffin wax)均匀混合而成，其中，固体石 蜡选自熔点高于50℃的固体石蜡，固体石蜡和液体石蜡的比值为1∶4～1∶12 (w/v)。

与现有技术相比，上述技术方案采用熔点高于50℃的固体石蜡熔化后和液 体石蜡按一定比例混合配制成一种混合石蜡，经过测试(参见具体实施例)， 该混合石蜡熔点在27～38℃之间，用于将PCR反应液中酶和其它成份隔离，熔 点适中，在-20℃的条件下PCR反应试剂可保存半年。若PCR反应体系中还含 有UNG酶，当需要熔化石蜡，使酶和其它成份混合时，无须加热到50℃或以 上，不会影响UNG酶在PCR反应液中发挥防污染作用，从而不会因此而对实 验结果产生影响。此外，本发明实施例的混合石蜡制造方法简单，成本低。

附图说明

图1是本发明实施例提供的PCR反应试剂中加入石蜡后对基因1扩增的 Ct值影响

图2是本发明实施例提供的PCR反应试剂中加入石蜡后对基因2扩增的 Ct值影响

图3是是本发明实施例6混合石蜡的质谱图。

具体实施方式