[发明专利]一种检测A群轮状病毒的试剂盒和寡核苷酸序列有效
申请号: | 200910180005.6 | 申请日: | 2009-10-21 |
公开(公告)号: | CN101671746A | 公开(公告)日: | 2010-03-17 |
发明(设计)人: | 魏海燕;曾静;王金花;周琦;张西萌 | 申请(专利权)人: | 中华人民共和国北京出入境检验检疫局 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93 |
代理公司: | 北京正理专利代理有限公司 | 代理人: | 王德桢 |
地址: | 100026*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 轮状病毒 试剂盒 寡核苷酸 序列 | ||
1.一组检测A群轮状病毒的寡核苷酸,其特征在于:由序列表SEQ ID No.1至 序列表SEQ ID No.5所示碱基序列的寡核苷酸组成;其中SEQ ID No.1为外侧上游引 物,SEQ ID No.2为外侧下游引物,SEQ ID No.3为内侧上游引物,SEQ ID No.4为内 侧下游引物,SEQ ID No.5为环引物。
2.一种检测A群轮状病毒的试剂盒,其特征在于:由以下试剂组成:
(1)TRIZOL裂解液;
(2)DEPC水;
(3)2×RT-LAMP反应液:其组分为:2×ThermoPol缓冲液、1.6M甜菜碱、3.6mM dNTPs、8mM MgSO4、0.4μM外侧上游引物、0.4μM外侧下游引物、3.2μM内侧上游引 物、3.2μM内侧下游引物、1.6μM环引物;外侧上游引物是序列表SEQ ID No.1所示的核 苷酸序列,外侧下游引物是序列表SEQ ID No.2所示的核苷酸序列,内侧上游引物是序 列表SEQ ID No.3所示的核苷酸序列,内侧下游引物是序列表SEQ ID No.4所示的核苷酸 序列,环引物是序列表SEQ ID No.5所示的核苷酸序列;
(4)Bst DNA聚合酶;
(5)AMV反转录酶;
(6)阴性对照:生理盐水;
(7)阳性对照:体外转录的A群轮状病毒RNA片段或含A群轮状病毒靶基因的质粒 DNA;
(8)显色液:SYBR Green I染料;
其中,所述2×RT-LAMP反应液中,2×ThermoPol缓冲液含有0.2%Triton X-100、20 mM(NH4)2SO4、20mM KCl、4mM MgSO4和pH 8.8的40mM Tris-HCl。
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