[发明专利]卷烟烟气体外微核检测方法

权利要求书

1、一种卷烟烟气体外微核检测方法，其特征在于：选用中国仓鼠卵巢细胞进行体外微核试验，通过细胞培养、卷烟烟气冷凝物制备、细胞染毒、固定、染色后，测定微核发生率。

2、根据权利要求1所述的卷烟烟气体外微核检测方法，其特征在于：其具体步骤如下：

1)细胞培养

中国仓鼠卵巢细胞复苏之后，接种到25mL细胞培养瓶，在二氧化碳培养箱培养24h，待细胞繁殖到5.0×10⁵-1.0×10⁶个/瓶，用胰蛋白酶将贴壁生长的细胞脱离细胞瓶底，并传至足够的培养瓶中继续培养，至细胞浓度达到所需浓度；

2)卷烟烟气冷凝物制备

标准卷烟抽吸条件下，用二甲基亚砜DMSO萃取烟气冷凝物CSC，用细胞培养基将卷烟烟气冷凝物稀释至不同剂量，保证至少有4个非0的浓度，并配制新鲜的S9(大鼠肝微粒体酶)混合液；

3)细胞染毒

传代后的细胞培养24h后，吸出原有培养基，用磷酸盐缓冲液冲洗1-2遍后，然后将不同剂量的CSC加入到培养瓶，如需活化加入S9混合液，每个剂量为2个培养瓶，继续于二氧化碳培养箱培养27h；

4)吖啶橙染色

培养结束后，用胰蛋白酶将贴壁生长的细胞脱离细胞瓶底，然后进行玻片涂片，用固定液(冰醋酸∶甲醇为1∶3)对细胞进行固定，然后用吖啶橙染剂染色5min，冲洗染色剂，晾干玻片；

5)微核计数及计算微核发生率

在显微镜下观察微核，并计数，每个培养瓶细胞计数1000个含微核的细胞数，即每个剂量计数2000个细胞的微核发生率。