[发明专利]一种制备重组人PDCD5的方法

权利要求书

1、一种制备重组人PDCD5的方法，该方法包括表达重组人PDCD5工程菌的高密度发酵、菌体破碎、重组人PDCD5粗提和层析分离，其特征在于：

(1)通过调节破碎前菌液的pH或菌体破碎液的pH，使杂蛋白沉淀；和

(2)通过层析分离组合

以简化重组人PDCD5的纯化工艺和提高重组人PDCD5的纯度。

2、根据权利要求1的方法，其特征在于在菌体破碎前，调节菌液pH至1.5-5.0，优选pH 1.5-4.0，首选pH 2.0-3.0，沉淀部分杂蛋白。

3、根据权利要求1的方法，其特征在于在菌体破碎后，调节破碎液的pH至1.5-5.0，优选pH 1.5-4.0，首选pH 2.0-3.0，沉淀破碎液中的部分杂蛋白。

4、根据权利要求1-3之一的方法，其特征在于将调为酸性的离心上清液的pH调至6.0-8.0，优选6.5-7.5，首选6.8-7.2，进一步沉淀部分杂蛋白。

5、根据权利要求1-4之一的方法，其特征在于在层析分离时选用阴离子-阳离子交换层析、阴离子交换-疏水作用层析、阳离子-阴离子交换层析、阳离子交换-疏水作用层析、疏水作用-阴离子交换或疏水作用-阳离子交换层析中的任意组合，优选阴离子-阳离子交换层析、阴离子交换-疏水作用层析，首选阴离子-阳离子交换层析。

6、根据权利要求1-6之一的方法，其特征在于阴离子交换层析介质选用Q-sepharose、DEAE-sepharose、CaptoQ-sepharose、Toyopearl GigaCap Q-650或Toyopearl DEAE-650，优选Q-sepharose、DEAE-sepharose、CaptoQ-sepharose、，首选Q-sepharose；阳离子交换层析介质选用CM-sepharose、SP-sepharose、Toyopearl SP-550、Toyopearl CM-650，优选CM-sepharose、SP-sepharose，首选CM-sepharose；疏水作用层析介质选用Phenyl-sepharose、Butyl-sepharose、Toyopearl Butyl-650、Toyopearl Phenyl-650，优选Phenyl-sepharose、Butyl-sepharose，首选Phenyl-sepharose。

7、根据权利要求1-7之一的方法，其特征在于在使用阴离子交换层析时使用Q-sepharose介质和20mmol/L、pH7.2的磷酸缓冲液，用10±3.5ms/cm、pH 7.2的缓冲液洗涤杂蛋白，再用20±5ms/cm、pH 7.2的磷酸缓冲液洗脱目的蛋白。

8、根据权利要求1-7之一的方法，其特征在于在使用阳离子交换层析时使用CM-sepharose介质和pH 5.0、20mmol/L柠檬酸缓冲液，先用电导11±2ms/cm、pH5.0的缓冲液洗涤杂蛋白，再用20±3ms/cm、pH5.0的缓冲液洗脱目的蛋白。

9、根据权利要求1-7之一的方法，其特征在于在使用疏水层析时使用Phenyl-sepharose介质和pH 7.2、1mol/L硫酸铵、20mmol/L磷酸缓冲液，用1.0mol/L硫酸铵、pH 7.2、20mmol/L的磷酸缓冲液洗涤杂蛋白，用pH 7.2、20mmol/L的磷酸缓冲液洗脱目的蛋白。