[发明专利]一种花脸蘑蛋白LsAPII及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 200910093039.1 | 申请日： | 2009-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN101665531A | 公开（公告）日： | 2010-03-10 |
| 发明（设计）人： | 燕继晔;李兴红;周莹;严红;马凤金 | 申请（专利权）人： | 北京市农林科学院 |
| 主分类号： | C07K7/08 | 分类号： | C07K7/08;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/18;A01N37/46;A01P1/00 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 | 代理人： | 胡长远 |
| 地址： | 100097北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 花脸 蛋白 lsapii 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种抗植物病毒的花脸蘑蛋白LsAPII，所述花脸蘑蛋白来自花脸蘑 (Lepista sordida)，其N端氨基酸序列为：DGEYVNDLEGTISVDA；经SDS聚丙 烯酰胺凝胶电泳鉴定，所述花脸蘑蛋白LsAPII的分子量为17.8KD；所述的花 脸蘑蛋白LsAPII，按照如下方法制备：
(1)、将花脸蘑子实体粉末2g加入到0.025M、pH8.0的磷酸缓冲液20ml 中浸泡2h，10000rpm离心25min，弃沉淀，取上清液；
(2)、向步骤(1)所得上清液中加入硫酸铵至饱和度为50％，在4℃放置 8h，10000rpm离心25min，弃沉淀，取上清液；
(3)、向步骤(2)所得上清液中加入硫酸铵至饱和度为70％，在4℃放置 8h，10000rpm离心25min，收取沉淀；
(4)、用0.025M、pH8.0的磷酸缓冲液溶解步骤(3)所得沉淀，然后经3 倍重量的重蒸馏水透析8小时，将透析得到的透析液分别用Millipore公司生 产的Amicon Ultra-153KD和30KD的超滤管进行超滤截留，留取分子量在9～ 90KD的蛋白溶液；
(5)将步骤(4)所得蛋白溶液经阴离子交换柱分离，用0.3mol/L的氯 化钠洗脱，收集洗脱液，洗脱液中所含物质即为花脸蘑蛋白LsAPII。
2.权利要求1所述的花脸蘑蛋白LsAPII的制备方法，包括如下步骤：
(1)、将花脸蘑子实体粉末2g加入到0.025M、pH8.0的磷酸缓冲液20ml 中浸泡2h，10000rpm离心25min，弃沉淀，取上清液；
(2)、向步骤(1)所得上清液中加入硫酸铵至饱和度为50％，在4℃放置 8h，10000rpm离心25min，弃沉淀，取上清液；
(3)、向步骤(2)所得上清液中加入硫酸铵至饱和度为70％，在4℃放置 8h，10000rpm离心25min，收取沉淀；
(4)、用0.025M、pH8.0的磷酸缓冲液溶解步骤(3)所得沉淀，然后经3 倍重量的重蒸馏水透析8小时，将透析得到的透析液分别用Millipore公司生 产的Amicon Ultra-153KD和30KD的超滤管进行超滤截留，留取分子量在9～ 90KD的蛋白溶液；
(5)将步骤(4)所得蛋白溶液经阴离子交换柱分离，用0.3mol/L的氯化 钠洗脱，收集洗脱液，洗脱液中所含物质即为花脸蘑蛋白LsAPII。
3.权利要求1所述的花脸蘑蛋白LsAPII在防治烟草花叶病毒病上的应用。
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