[发明专利]一种检测传染病病原体的方法及试剂盒

权利要求书

1、一种对可能存在于生物样品中的传染病病原体进行检测的方法，所述传染病病原体包括禽流感病毒H5亚型、禽流感病毒H7亚型、SARS冠状病毒、汉坦病毒、耶氏鼠疫菌和炭疽杆菌，包括：

(i)扩增生物样品的核酸片段，所述核酸片段为以下的一种或一种以上的组合：

禽流感病毒H5亚型HA基因如SEQ ID NO.1所示的核酸片段；

禽流感病毒H7亚型HA基因如SEQ ID NO.2所示的核酸片段；

SARS冠状病毒的核衣壳蛋白基因如SEQ ID NO.3所示的核酸片段；

汉坦病毒核衣壳蛋白基因如SEQ ID NO.4所示的核酸片段；

耶氏鼠疫菌pPCP1基因如SEQ ID NO.5所示的核酸片段；

炭疽杆菌假定蛋白基因如SEQ ID NO.6所示的核酸片段；

(ii)用探针进行检测，所述探针与步骤(i)扩增产物中的一种特异性杂交。

2、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(i)利用NASBA技术扩增样品的核酸片段，NASBA运行条件为41℃～45℃温育90～150分钟。

3、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(ii)中所述探针与步骤(i)所得扩增产物的杂交在固体支持物上进行。

4、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(i)使用以下6组寡核苷酸序列的一种或一种以上的组合作为引物进行扩增：

第1组引物用于扩增如SEQ ID NO.1所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；

第2组引物用于扩增如SEQ ID NO.2所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；

第3组引物用于扩增如SEQ ID NO.3所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；

第4组引物用于扩增如SEQ ID NO.4所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示；

第5组引物用于扩增如SEQ ID NO.5所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示；

第6组引物用于扩增如SEQ ID NO.6所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示。

5、根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(ii)使用捕获探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示，所述捕获探针直接或间接的连接在固体支持物上。

6、根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，步骤(ii)中使用以下的核苷酸序列作为检测探针：

序列1如SEQ ID NO.9所示，用于检测如SEQ ID NO.1所示的核酸片段；

序列2如SEQ ID NO.12所示，用于检测如SEQ ID NO.2所示的核酸片段；

序列3如SEQ ID NO.15所示，用于检测如SEQ ID NO.3所示的核酸片段；

序列4如SEQ ID NO.18所示，用于检测如SEQ ID NO.4所示的核酸片段；

序列5如SEQ ID NO.21所示，用于检测如SEQ ID NO.5所示的核酸片段；

序列6如SEQ ID NO.24所示，用于检测如SEQ ID NO.6所示的核酸片段。

7、一种对可能存在于生物样品中的传染病病原体进行检测的试剂盒，其包含至少1组引物，所述引物用于扩增如SEQ ID NO.1所示的核酸片段、如SEQ ID NO.2所示的核酸片段、如SEQ ID NO.3所示的核酸片段、如SEQ IDNO.4所示的核酸片段、如SEQ ID NO.5所示的核酸片段或如SEQ ID NO.6所示的核酸片段。