[发明专利]亚洲梨火疫病菌的检测试剂盒及检测方法无效
| 申请号： | 200910030132.8 | 申请日： | 2009-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN101509036A | 公开（公告）日： | 2009-08-19 |
| 发明（设计）人： | 胡白石;田艳丽;张蕾;刘凤权 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12R1/18 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210095江苏省南京市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 亚洲 疫病 检测 试剂盒 方法 | ||
【权利要求书】：
1.亚洲梨火疫检测试剂盒，包括以下成分：
亚洲梨火疫的特异性引物序列如下：
上游引物HrcC-F1：5′-GACGTTTGCACCTGGAAACCG-3′
下游引物HrcC-R1：5′-GCGGTAGGTAATCAAGGCCAC-3′
试剂盒反应体系：
1mL检测溶液包括：50mmol.L-1Tris.Cl和125mmol.L-1KCl和2.5 mmol.L-1MgCl2和10mMdNTPs和上、下游引物HrcC-F1/HrcC-R10.25mmol/mL和 0.1mg.mL-1BSA和Taq DNA聚合酶100单位。
2.权利要求1所述亚洲梨火疫检测试剂盒用于检测亚洲梨火疫的方法，包括：
取1μLDNA溶液或菌悬液，加入9μL试剂盒溶液和15μL灭菌去离子 水，总体积为25μL；
PCR扩增程序为94℃变性3分钟；进入循环，94℃变性30秒，62℃退火30 秒，72℃延伸30秒，30个循环；最后72℃延伸5分钟；
扩增产物的电泳检测：取10μL PCR扩增产物，在1％即1克/100毫升的琼 脂糖凝胶上进行电泳，电压为50-100V，30分钟后在紫外光下检测结果；如果 存在分子量为476bp的DNA条带，则证明所检测病原为亚洲梨火疫。
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