[发明专利]金黄色葡萄球菌肠毒素C3制备、制剂、用量及其用途

说明书

技术领域

本发明属生物工程，涉及金黄色葡萄球菌肠毒素C3(StaphylococcalEnterotoxin C3，SEC3)的制备方法、纯化方法、制剂、用量及其在制备肿瘤、病毒及调节机体免疫药物中的应用，本发明中的SEC3制剂、用量及应用领域也包括非本发明的其他途径上得到的SEC3的范围。

背景技术

超级抗原(SAg)是瑞典科学家怀特于1989年首次推出的新免疫学名词，它是由细菌或病毒编码的蛋白分子，可不需要抗原(APC)处理，以完整的蛋白质分子形式直接与APC膜上的MHC-II类分子抗原结合槽外侧结合，导致带有特异性Vβ片段的T细胞大量活化增值，活化的T细胞数是普通抗原的数千倍乃至数万倍，但用量微小，是目前世界上已知最强大的免疫细胞激活剂。激活的T细胞、NK细胞、LAK细胞和巨噬细胞，除了直接杀灭肿瘤细胞外，诱导产生多种内源性细胞因子和细胞毒来治疗癌症、艾滋病等多种免疫类疾病。根据10年超10000例的观察，抗癌总有效率达97.4％，抑癌率达42.5％。国际上公认的超级抗原物质来源于金黄色葡萄球菌肠毒素(StaphylococcalEnterotoxin，SE)，这种具有强烈毒性的物质被发现具有超级抗原的特性后，成为治疗人类疾病的福音。

SE作为药品有以下优点：

①.直接杀灭(SDCC)：SE直接与MHC-II类分子结合，呈到T淋巴细胞，激活T细胞，直接杀伤肿瘤细胞。

②.间接杀灭：SE活化体内多种免疫细胞，释放大量细胞因子，攻击肿瘤细胞，打破了机体对肿瘤的耐受并扩大对肿瘤的反应。

③.提高肿瘤细胞对SDCC的易感性：增强对肿瘤细胞的杀灭。

④.保护白细胞：在治疗时，可以保护患者造血功能不被破坏，明显预防和治疗相关性的白细胞下降。

⑤.类似干扰素，却优秀与干扰素。

⑥.适合于各种肿瘤患者群体使用：直接治疗，姑息治疗，延长生命，提高生存质量，预防肿瘤转移及复发。

⑦.用于病毒引起的疾病治疗：如病毒性肝病，艾滋病等。

⑧.用于免疫力低下患者治疗使用。

所以SEC3特殊的作用机理及强大的治疗效果，是目前临床常用药不可相比的。

自发现超抗原并挖掘出SE到现在，研究发现，SE分为A、B、C1、C2、C3、D及E等多种血清型，其中SEA、SED、SEE的氨基酸序列同源性高，SEA和SEE同源性大于90％，SEB、SEC1、SEC2、SEC3之间的同源性没有上述3个分型高，但彼此之间还是存在一定的同源性，SEA、SEE由257个氨基酸组成，SEB、SEC1、SEC2则为239个氨基酸组成，SEC3为238个氨基酸组成，SED为258个，各型的SE的C-末端和N-末端氨基酸残基都不完全相同。

目前研究较多的是SEA、SEB、SEC(1，2，3)分型，研究发现，SEA、SEB安全性较低，腹腔注射SEA、SEB致幼猫呕吐的剂量为0.5μg，而SEC呕吐剂量为25μg，安全系数是前两个分型的50倍，所以SEC及分型更加安全。

在中国，以金黄色葡萄球菌C(SEC)的SEC2为主要有效成分的金黄色葡萄球菌滤液制剂作为肿瘤放化疗治疗的辅助药物应用于临床已有近十个年头，大量的临床数据证明使用后肿瘤患者的免疫能力获得了显著的提高，患者的食欲、睡眠以及全身状况均得到了明显好转。汤炜等通过对早期口腔癌采用局部金黄色葡萄球菌滤液制剂治疗及对晚期口腔癌应用黄色葡萄球菌滤液制剂联合化疗，发现其可使大量淋巴细胞及纤维组织聚集在癌巢附近，并能观察到肿瘤细胞显著减少甚至部分病例肿瘤细胞消失，但是患者用金葡菌滤液注射液(主要成分为SEC2)后约24％～60％的患者出现发热、疼痛等副作用，必要时需要对症治疗，给临床使用制造了很大的障碍，如，临床统计分别有28％和24％的肿瘤患者在使用金黄色葡萄球菌滤液制剂，并联合卡铂治疗恶性胸腔积液过程中出现了发热、局部疼痛等副作用；甚至有的临床统计报道黄色葡萄球菌滤液制剂联合顺铂治疗恶性胸水过程中出现的副作用约占治疗组患者总数的65.5％。

现代研究证实，在SEC的三个血清亚型中安全高效的是SEC3亚型，并且分子量只有26900，猴呕吐试验表明，SEC1及SEC2为5μg，而SEC3的呕吐剂量大于10μg，所以安全性及疗效明显优秀与C1、C2两个分型，把SEC3深度研究，开发成药品，用于疾病的治疗，更加具有意义，更加安全有效。所以SEC3的研究具有明显的创新性和发明性。