[发明专利]一种重组表达载体的基因序列及其构建方法

权利要求书

1、一种重组表达载体的基因序列，其特征在于该重组表达载体的基因序列中含有能够表达金黄色葡萄球菌nEbpS蛋白的基因序列。

2、根据权利要求1所述的重组表达载体的基因序列，其特征在于该重组表达载体的基因序列具有序列表中SEQ ID NO.4所述的碱基序列。

3、该重组表达载体的基因序列的构建方法，其特征在于构建方法的步骤包括：

(1)根据Genbank中ATCC25923标准菌株nEbpS基因序列，合成在5’端引入BamH I酶切位点的具有序列表中SEQ ID NO.1所述的碱基序列的上游引物；合成在5’端引入HindIII酶切位点的具有序列表中SEQ ID NO.2所述的碱基序列的下游引物；

(2)采用高保真酶、上游引物和下游引物利用PCR方法从金黄色葡萄球菌ATCC25923标准菌株基因组中扩增出nEbpS蛋白目的基因；

(3)PCR产物的回收和纯化；

(4)PCR产物的双酶切处理和纯化；

(5)克隆载体的双酶切处理及纯化；

(6)目的片段与克隆载体的连接；

(7)连接产物诱导转化宿主细胞感受态；

(8)培养转化后的宿主细胞，筛选、鉴定、扩培，抽提得重组质粒；

(9)重组质粒双酶切处理和纯化；

(10)表达载体双酶切处理和纯化；

(11)目的片段与表达载体的连接，得重组表达载体。

4、根据权利要求3所述的重组表达载体的基因序列的构建方法，其特征在于克隆载体采用pMD19-T。

5、根据权利要求3所述的重组表达载体的基因序列的构建方法，其特征在于宿主细胞选用DH5α大肠杆菌。

6、根据权利要求3所述的重组表达载体的基因序列的构建方法，其特征在于所述的筛选是对转化宿主细胞进行氨苄青霉素抗性菌株的筛选。

7、根据权利要求3所述的重组表达载体的基因序列的构建方法，其特征在于表达载体采用pQE30。