[发明专利]阪崎肠杆菌显色培养基、检测试剂盒及检测方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种微生物的检测方法及所用的组合物。

【背景技术】

食品微生物安全是食品安全中的重中之重，阪崎肠杆菌(Enterobactersakazakii)是乳制品中新发现的引起广泛关注的一种致病菌。1961年，两位英国科学家首次报道2例由阪崎肠杆菌引起的脑膜炎病例，随后相继在美国、希腊、荷兰、冰岛、加拿大、比利时等国家报道了新生儿阪崎肠杆菌感染事件。由此可见，由阪崎肠杆菌引发的婴儿、早产儿脑膜炎、败血症及坏死性结肠炎散发和暴发的病例已在全球范围内相继出现，在特定情况下，由阪崎肠杆菌引发疾病而致死的病例可高达40％～50％。多份研究报告表明婴儿配方奶粉是当前发现致婴儿、早产儿脑膜炎、败血症和坏死性结肠炎的主要感染渠道，故已引起世界各国政府部门的重视。继美国FDA2002年从惠氏婴儿配方奶粉中检出阪崎肠杆菌后，2002年9月，香港从德国″美乐宝″奶粉中也检出含有阪崎肠杆菌，2003年美国美赞臣公司又主动召回在美国生产的一批检出极微量阪崎肠杆菌的罐装早产儿特殊配方奶粉。此后，配方奶粉中阪崎肠杆菌污染问题成为世界瞩目的焦点。我国最近也先后从进口和国产婴幼儿配方奶粉中检出了阪崎肠杆菌。2001年7月，福建省疾病预防控制中心从一箱进口利乐包纯牛奶中检测到阪崎肠杆菌；2004年4月，我国安徽省阜阳地区连续发生了与″劣质奶粉″有关的婴儿营养状况不良甚至导致死亡事件的报道，引起了国务院及相关部门的极大关注。2004年2月，世界卫生组织和联合国粮食及农业组织就婴儿配方奶粉含阪崎肠杆菌这课题，共同召开专家会议。2004年3月在美国华盛顿召开的国际食品卫生法典委员会第36次会议，也对阪崎肠杆菌的危险性给予了特别的关注。WHO的代表介绍了FAO/WHO有关婴幼儿配方食品中阪崎肠杆菌会议的讨论情况，大会通过由加拿大牵头组成起草工作组，修订婴幼儿食品的国际卫生操作规范，并制定阪崎肠杆菌及相关微生物的标准。婴儿是父母、国家未来的希望，每一个出生的婴儿几乎都需要喝奶粉，良好的婴儿奶粉有助于婴儿的健康成长。因此，对这种致病菌的监测和检验就显得越来越重要。

为有效控制病原的发生和扩散，准确及时的检测手段是预防和控制阪崎肠杆菌传播的关键。目前，阪崎肠杆菌传统的检测方法需要分离培养、镜检观察、生化鉴定等多个步骤，检测周期长，整个过程大约6-7天，且操作复杂，已不能满足食品中病原菌快速检测的现实需要，而且当有其它的肠道菌群存在时会影响阪崎肠杆菌在传统结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂培养基中的检出。近年来，快速检验法中的PCR法、金标试纸法、免疫法和特异性的显色生化鉴定技术等快速检验方法，已在不断得到扩大应用，使阪崎肠杆菌的快速检测有了很大发展。但是这些技术也存在一定缺陷，如技术要求高，设备操作复杂，需要专业的技术人员进行操作，以及检测费用昂贵等。

【发明内容】

本发明旨在提供一种成本低廉并能快速检测出阪崎肠杆菌的显色培养基。

本发明还提供了一种含有上述培养基的阪崎肠杆菌检测试剂盒，以及使用检测试剂盒检测阪崎肠杆菌的方法。

所述的阪崎肠杆菌显色培养基，其配方为：蛋白胨8～20g、牛肉膏粉4～7g、氯化钠4～7g、胆盐1.0～2.0g、琼脂12～20g、显色底物X-a-glucopyranoside 0.05～0.5g、Na₂CO₃ 0.01～0.04g、柠檬酸铁铵0.3～2.0g、硫代硫酸钠0.3～2.0g。

上述显色培养基较优选的配方为：蛋白胨11g、牛肉膏粉5g、氯化钠5g、胆盐1.5g、琼脂15g、显色底物X-a-glucopyranoside 0.1g、Na₂CO₃ 0.02g、柠檬酸铁铵1.0g、硫代硫酸钠1.0g。

所述的阪崎肠杆菌检测试剂盒，其组成为：上述阪崎肠杆菌显色培养基、增菌液A和增菌液B。

其中，增菌液A为高压灭菌处理的缓冲蛋白胨水培养基(BP)；

增菌液B为高压灭菌处理的改良月桂基硫酸盐胰蛋白月示肉汤(mLST)。

所述的检测阪崎肠杆菌的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)制备显色平板：每1000mL蒸馏水或去离子水中加入29.66～60.54g阪崎肠杆菌显色培养基，搅拌加热煮沸至完全溶解，121℃高压灭菌15min，待冷至40～50℃，倒平板，备用；

(2)一步增菌：将样品置于增菌液A中，混合均匀后37℃培养16-20h；