[发明专利]不结球白菜抗芜菁花叶病毒基因的分子标记方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种农业技术领域的筛选病毒抗性基因分子标记的方法，具体是一种不结球白菜抗芜菁花叶病毒基因的分子标记方法。

背景技术

不结球白菜(又名青菜)是我国非常重要的大众化绿叶蔬菜，常年供应市场，但是，病毒病尤其是芜菁花叶病毒病对不结球白菜危害严重，芜菁花叶病毒通过蚜虫传播，蔓延迅速，系统性侵染植物，有潜伏期。发病后产生花叶和病斑，造成蔬菜品质下降和作物减产，无农药可根治，一经发生将损失惨重。现在常用的防治方法是防治蚜虫的发生和蔓延，防治成本较高，且已造成农药残留，不能通过检验供应市场。所以，选育抗芜菁花叶病毒的不结球白菜品种工作在许多年前就已开展，传统的杂交选育方法耗费大量的人力物力，但因芜菁花叶病毒有许多生理小种和变种，所以成效并不显著。现在，分子辅助育种技术已被广泛应用，借助分子标记可以对育种材料从DNA(脱氧核糖核酸)水平上进行选择，增强选择的针对性和准确性，省时省力，再结合传统遗传育种方法将加快选择进度，从而显著提高育种效率。

经对现有技术的检索发现，芜菁花叶病毒(TuMV)是1921年美国人Gardner等和Schultz同时在白菜上发现的，论文都发表在当年第22期《Journal ofAgricutral Research》上，分别是第123页至124页的Turnip Mosaic和第173页至177页的A transmissible mosaic disease of Chinese cabbage。在芜菁花叶病毒抗性基因研究方面，国际上，Walsh等人最先标记和命名了芜菁花叶病毒抗性基因TuRB01和TuRB02，发表在《Theoretical and Applied Genetics》1999年第99期第1149页至1154页，题目为Characterisation of resistancetoturnip mosaicvirus in oilseed rapa(Brassica napus)and geneticmapping of TuRB01；此后，在Brassica napus(甘蓝类蔬菜)上陆续标记出TuRB03、TuRB04和TuRB05抗性基因和在白菜上标记出TuRB01b、ConTR01和retr01基因。在国内，结球甘蓝抗芜菁花叶病毒相关基因TuR2基因被克隆，大白菜上的一对抗芜菁花叶病毒隐性基因被标记；最新的研究是Zhang等人标记了大白菜抗芜菁花叶病毒的4个数量性状(Tu1-4)，发表在《Plant Breeding》2008年第127期第82页至86页上，题目为Quantiative trait loci analysis for resistanceagainst Turnip mosaic virus based on a doubled-haploid population inChinese cabbage。国内外关于抗芜菁花叶病毒基因的研究虽已经开展了十年，但不结球白菜抗芜菁花叶病毒基因的研究却没有报道过。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种不结球白菜抗芜菁花叶病毒基因的分子标记方法，在不结球白菜上开展了抗芜菁花叶病毒基因的研究工作，为不结球白菜抗病育种提供依据。

本发明是通过以下技术方案实现的，本发明包括步骤如下：

①抗感芜菁花叶病毒的不结白菜亲本材料的筛选；

②不结球白菜材料的栽培；

③抗感亲本材料的杂交和F1(子一代)自交获得F2群体；

④芜菁花叶病毒在不结球白菜上的接种和检测；

⑤不结球白菜材料的DNA提取；

⑥不结球白菜抗芜菁花叶病毒的抗感池建立；

⑦抗病基因的分子标记筛选；

⑧抗病基因连锁标记交换率计算；

⑨抗病基因连锁标记距离计算和图谱建立。

所述抗感芜菁花叶病毒的不结白菜亲本材料的筛选，具体为：把从不结球白菜育种单位得到的高抗和高感芜菁花叶病毒的多份材料，利用分子标记(如AFLP、SRAP)的方法进行亲缘关系远近比较，筛选出亲缘关系较远的抗病和感病材料用于研究。

所述不结球白菜材料的栽培，具体为：不结球白菜种子，要先在25℃培养箱中催芽，然后播种到塑料穴盘中，长出幼苗后，要进行低温春化，再放置到具有防虫网的玻璃温室中培养，白天温度为25-30℃，夜间温度为15-20℃，光照、水分和氧气要充足。