[发明专利]检测核酸链和物质间结合或相互作用的检测方法

说明书

相关申请的交叉引用

本发明包含于2007年5月14日向日本专利局提交的日本专利申请JP 2007-128188涉及的主题，将其全部内容结合于此作为参考。

技术领域

本发明涉及检测核酸链(检测用核酸链，detecting nucleic acid)和可用于检测特定物质或者物质间的结合或相互作用的检测方法。更具体地说，本发明涉及能够检测特定物质或者物质间的结合或相互作用的检测核酸链，并且还涉及物质之间的结合或相互作用的检测方法。

背景技术

检测蛋白质、有机小分子、核酸、多聚复合物(多聚配合物)、细胞、细胞组织、金属离子、微生物、病毒等的技术在各种领域的研究、开发等中担负非常重要的角色。如今，检测技术的开发在各种领域，例如，诸如特定疾病的诊断、药物开发、食品等的卫生控制、以及环境污染的净化和恢复中正在进行。

在它们之中，允许在底物(基板，substrate)的表面(界面)等上发生物质间的相互作用或反应，并通过物理方法、光学方法等检测它的技术，近年来尤其得到发展。这些技术已作为重要的技术，在诸如疾病的诊断、化合物(例如药物)的筛选、法医学、遗传信息的综合分析、生物物质(biosubstance)的功能分析、蛋白质组(proteome)分析、以及活体内相互作用的分析的领域中得到越来越多的应用。

作为检测技术，JP-A-08-333398公开了一种使用特异性地识别尿中皮质醇(一种激素)的多克隆抗体或单克隆抗体的免疫测定方法；JP-A-2007-000009公开了一种用于通过使用对双链核酸特异的降解酶而简易且准确地检测靶核酸分子的方法；JP-A-2006-133098公开了一种蛋白质的检测方法，该方法通过在分离介质中插入有源电极(活性电极)，通过其使蛋白质样品进行电泳，以氧化该蛋白质的官能团，并测量所产生的电流来检测蛋白质的有无；JP-A-2002-296274公开了一种用于检测宫颈涂片标本中瘤细胞及其前体的方法，该方法通过用抗体或核酸探针同时染色并检测至少两种不同的分子标记物(该分子标记物表示基因表达中的疾病相关的变化)而进行检测；以及JP-A-2006-262775公开了一种微生物细胞的检测方法，其特征在于通过使发光增感剂(luminescencesensitizer)与微生物细胞样品接触来增加待被微生物细胞发射的荧光强度。

这里，对与本发明有关的“适体”进行描述。术语“适体”意指具有允许核酸分子或肽特异性地结合于特定物质，例如蛋白质、有机小分子、核酸、多聚复合物、细胞、细胞组织、金属离子、微生物、病毒等的功能的核酸分子或肽。“适体”可不受限制地与任何对象(object)结合，并允许以高亲和性(亲和力)和高特异性结合于对象。其易于大量合成，并且其作用机制简单。因此，其可广泛地应用于诸如结构蛋白组学、靶分析、靶确认(targetvalidation)、以及药物开发的领域中。

由于上述原因，近年来正在进行各种适体的技术开发。例如，JP-A-2006-320289公开了一种RNA适体，其特异性地结合于来自异常朊病毒蛋白质(mSAF)的原纤维(fibril)，并可用于朊病毒病的诊断、治疗或预防；以及JP-A-2007-082543公开了一种抑制大肠杆菌释放因子的RNA适体。

发明内容

上述的物质检测方法都具有优点和缺点。例如，它们中的每一个都涉及一个或多个问题，因为它不适于小分子的检测，如果样品为痕量时它不能检测，和/或它要求特殊的步骤以避免物质的失活。因此，仍有进一步开发的空间。

因此，本发明的目的是提供一种新型的检测核酸链，其又可提供一种至今未知的物质检测方法。

本发明的发明人以利用适体的特性来开发物质的检测方法为目的而进行了广泛的研究。结果，本发明的发明人从根本上改变了传统方法中已实践的测量探针或靶(目标物，target)本身的变化的观念，并已找到一种新方法，该方法能够通过设计制造一种不同于适体或靶的物质，在适体与靶的结合上发生变化，并测量那种变化来检测靶。

因而，在本发明的第一个方面中，提供了一种检测核酸链，该检测核酸链包括：具有能够起适体作用的第一碱基序列区的第一核酸链，以及具有第二碱基序列区的第二核酸链，该第二碱基序列区与第一碱基序列区互补并与第一碱基序列区形成互补链，其中，检测核酸链设计成使得当预定的物质与第一碱基序列区相互作用时，第一碱基序列区和第二碱基序列区形成的互补链解离(离解，dissociate)为单链。