[发明专利]多肽类物质、其制备方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及多肽类物质，具体地说两种活性多肽、其制备方法及其用途。

背景技术

“心肌保护”近年来一直是心脏内、外科研究的热点。最近资料表明，缺血缺氧的心肌细胞内会发生许多变化，包括细胞内钙超载，自由基产生，膜损害，ATP(adenosine triphosphate，ATP)水平下降，氧耗竭等等。

为了干预心肌缺血及保护心肌，近20年来研究了许多药物，如β-受体阻滞剂，钙拮抗剂，转换酶抑制剂，各种氧自由基清除剂等，但其对心肌的保护效果临床尚未肯定。现有治疗心肌缺血的药物，还没有一种能绝对减少心肌梗死，对抗心肌缺血。

现有的各类心血管病治疗药物，除转换酶抑制剂具有阻滞生长因子产生，抑制蛋白质合成，减轻心肌肥厚(Hypertrophy)的作用外，其它药物均无直接调节心肌生长、分化、修复的作用。近年来，国外已开始重视使用药物方法诱导心肌自身的保护能力，如转导基因促进心肌细胞再生等的研究，Cardiotrophin及Myotrophin的研究。另一方面，通过细胞外信号触发各种传递机制，调控心肌、血管细胞的增殖或重构。但是所有这些研究都处于动物试验或临床前研究阶段。

上述研究清楚地证明：在体外循环心肌保护方法尚未完善的情况下，设计一种对机体无损害，又能于术前、术中及术后保护心肌的药物，对探索心肌缺血及再灌注损伤的防治，提供新的思路和途径，将有重要意义。

ZL94102798公开了一种心肌细胞生长刺激肽及其制备方法，选取健康幼年哺乳动物的心脏，采用机械方式捣碎、-20℃深冻-溶解后加热60-100℃，再-20℃深冻-溶解后离心3000rpm，经负压截留柱-除菌-分装-冻干-包装，得到分子量小于20000道尔顿的多肽类活性物质。

ZL94102799公开了一种具有刺激原代培养的心肌细胞的DNA合成和蛋白质合成的心肌细胞生长刺激肽(GMGSP)，是从健康幼年哺乳动物的心脏中制备提取，在pH2-9范围内稳定；在加热95-100℃10分钟，60-70℃30分钟下生物活性不改变；在多种蛋白水解酶，37℃2小时条件下生物活性丧失；在水溶液22℃-30℃条件下可形成聚合体但生物活性改变不明显；在加入3％-8％甘露醇冻干密封条件下，室温贮存1.5年，4℃贮存2年，-20℃贮存3年，生物活性不改变；HPLC分析表明：所述GMGSP由四个组分组成，各组分相对峰及保留时间分别为：10.4％(2.88分)，6.4％(3.93分)，36.3％(5.09分)，7.3％(7.41分)，每个组分均具有生物活性；经SDS-PAGE分析显示的两条带分子量分别为8500Da，10800Da，HPLC分析数均分子量9800Da，重均分子量10500Da，2个组分均有生物活性。

在中国发明专利03141352.8心肌肽及其用途中，该发明公开了心肌肽是从不包括人的健康哺乳动物的心脏中提取的，其中多肽的含量为75％-90％，游离氨基酸为6％-15％，核糖核酸含量为1％-2％，脱氧核糖核酸含量为3％-7％，重均分子量为1000-1000道尔顿。该发明还公开了所述的心肌肽在制备治疗心血管疾病药物以及心肌缺血和再灌注损伤药物方面的用途。而在中国发明专利03137133.7中公开了一种心肌肽的制备方法，其具体方法为：将不包括人的健康哺乳动物的心室肌洗净、切碎，加灭菌蒸馏水匀浆，匀浆液反复冷冻、解冻3-4次，加热至65-95℃过滤除渣，用板框滤器过滤得到粗滤液，在用中空纤维柱超滤，得到精滤液，用超滤膜超滤，截留重均分子量小于10000Da的心肌肽溶液，以反渗透浓缩柱浓缩，最后经过滤除菌，冷冻干燥得成品。

但是，上述研究结果表明，心肌肽是从不包括人的健康哺乳动物的心脏中提取的，其中含有多肽、游离氨基酸、脱氧核糖核酸等多种活性成分，

多肽是一类由各种氨基酸，按不同的顺序排列而组成的一种链状的蛋白质类化合物。此类化合物往往具有很强的生理活性和功能的特异性。因此，这些多肽类物质在制备治疗某些疾病药物中的用途很广泛。

然而至今为止，对于心肌肽中所含的多肽的序列以及用途都没有相关专利及文献报道。

发明内容

本发明目的在于提供两种多肽，其中一种多肽的序列为：

Trp-Ser-Asn-Val-Leu-Arg-Gly-Met-Gly-Gly-Ala-Phe，分子量为1294.75(简称心肌肽X)；在上述多肽的基础上通过在连接有色氨酸的一端依次连接丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸，形成一种新的多肽(简称心肌肽C)，其氨基酸的排列顺序为：