[发明专利]白唇竹叶青蛇毒降纤酶及其制备方法和在制药中的应用

权利要求书

1、白唇竹叶青蛇毒降纤酶，其特征是从我国白唇竹叶青蛇的毒液中分离纯

化得到的一种金属蛋白酶，并具有同时降解纤维蛋白原Aα链和B β链的活性，

其在聚丙烯酰胺凝胶电泳上的表观分子量还原和非还原条件下为66300道尔顿。

2、一种白唇竹叶青蛇毒降纤酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)白唇竹叶青蛇毒的预处理：收集的白唇竹叶青蛇毒液集中后冷冻干燥制得粗毒冻干粉，取白唇竹叶青蛇毒粗毒冻干粉1～5g，溶于5ml pH 7.5～8.5，0.04～0.06mol Tris-HCl缓冲液中，用离心机以3000～5000r/min离心8～12min，取上清液待用；

(2)DEAE-Sephadex A-25离子交换层析

用浓度0.04～0.06mol/L，pH 7.0～8.0的Tris-HCl缓冲液平衡SephadexA-25柱；将步骤(1)中制得的上清液上样，用浓度范围0.01～0.6mol/LNaCl 1000ml和0.04～0.06mol Tris-HCl缓冲液线性剃度洗脱，洗脱流速为0.20～0.30ml/min，将SephadexA-25柱层析分离出的I峰洗脱液冷冻干燥，溶解于3ml 0.01～0.6mol/L Tris-HCl缓冲液中制得待用溶液；

(3)DEAE-Sephadex G-100凝胶层析

用pH 7.5～8.5，0.01～0.02mol/L Tris-HCl缓冲液平衡DEAE-SephadexG-100凝胶层析柱，将步骤(2)中最后制得的待用溶液上样，洗脱流速为0.11～0.17ml/min，将DEAE-Sephadex G-100凝胶层析柱分离出的I峰洗脱液冷冻干燥分离物待用；

(4)CM-Sephadex C-25阳离子交换层析

用pH 5～6.5，浓度0.009～0.011mol/L的NaAc缓冲液平衡CM-SephadexC-50层析柱，把步骤(3)最后得到的I冷冻干燥待用分离物上样，用上述缓冲液洗脱，洗脱流速为0.20～0.30ml/min。

3、白唇竹叶青蛇毒降纤酶作为制备治疗血栓疾病的应用。